沉默CDC20基因通过抑制Wnt/β-连环蛋白信号通路对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的影响

doi:10.13481/j.1671-587X.20240514

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨细胞分裂周期蛋白20（CDC20）对子宫内膜癌（EC）细胞增殖和细胞周期的影响，并阐明其作用机制。方法实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blotting法检测人子宫内膜基质T-HESC细胞和人EC细胞（KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞）中CDC20 mRNA及蛋白表达水平，选择RL95-2细胞用于后续实验。将CDC20 shRNA干扰慢病毒转染至RL95-2细胞中，分为对照组、sh-NC组（感染阴性对照慢病毒）、sh-CDC20组（感染CDC20 shRNA干扰慢病毒）、sh-NC+SM04690组（感染阴性对照慢病毒后，加入64 nmol·L^-1 Wnt/β-连环蛋白信号通路抑制剂SM04690干预48 h）和sh-CDC20+SM04690组（感染CDC20 shRNA干扰慢病毒后，加入64 nmol·L^-1 SM04690干预48 h）。RT-qPCR法和Western blotting法检测不同细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平，CCK-8法检测各组细胞增殖活性，BrdU法检测各组细胞中BrdU阳性细胞百分率，流式细胞术检测各组G₂/M期细胞百分率，Western blotting法检测各组细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平。结果与T-HESC细胞比较，KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平均明显升高（P<0.05），其中RL95-2细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平最高。与sh-NC组比较，sh-CDC20组和sh-NC+SM04690组细胞增殖活性和BrdU阳性细胞百分率明显降低（P<0.05），G₂/M期细胞百分率明显升高（P<0.05），细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与sh-CDC20组比较，sh-CDC20+SM04690组细胞增殖活性和BrdU阳性细胞百分率明显降低（P<0.05），G₂/M期细胞百分率明显升高（P<0.05），细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论 EC细胞中CDC20呈高表达，沉默CDC20可能通过调控Wnt/β-连环蛋白信号转导诱导RL95-2细胞G₂/M期阻滞，抑制细胞增殖。

关键词: 子宫内膜癌, 细胞分裂周期蛋白20, 细胞周期, 细胞增殖, Wnt/β-连环蛋白信号通路

Abstract:

Objective To discuss the effect of cell division cycle protein 20 （CDC20） on the proliferation and cell cycle of endometrial carcinoma （EC） cells， and to clarify its mechanism. Methods Real-time fluorescence quantitative PCR（RT-qPCR） and Western blotting methods were used to detect the expression levels of CDC20 mRNA and protein in human endometrial stromal T-HESC cell and EC cells （KLE， RL95-2， ZJB-ENC1， and ECC-1 cells）. The RL95-2 cells were selected for the subsequent experiments. CDC20 shRNA interference lentivirus was transfected into the RL95-2 cells and the cells were divided into control group， sh-NC group （infected with negative control lentivirus）， sh-CDC20 group （infected with CDC20 shRNA interference lentivirus）， sh-NC+SM04690 group （infected with negative control lentivirus followed by treatment with 64 nmol·L?1 Wnt/β-catenin signaling pathway inhibitor SM04690 for 48 h）， and sh-CDC20+SM04690 group （infected with CDC20 shRNA interference lentivirus followed by treatment with 64 nmol·L?1 SM04690 for 48 h）. RT-qPCR and Western blotting methods were used to detect the expression levels of CDC20 mRNA and proteins in the cells in various groups； CCK-8 method was used to detect the proliferation activities of the RL95-2 cells in various groups； BrdU assay was used to detect the percentages of BrdU positive cells in various groups； flow cytometry was used to detect the percentages of the cells at G₂/M stage in various groups； Western blotting method was used to detect the expression levels of β-catenin， oncogene c-Myc， and cyclin D1 proteins in the cells in various groups. Results Compared with T-HESC cells， the expression levels of CDC20 mRNA and protein in the KLE， RL95-2， ZJB-ENC1， and ECC-1 cells were significantly increased（P<0.05）， and the highest expression levels of CDC20 mRNA and protein were observed in RL95-2 cells. Compared with sh-NC group， the proliferation activities and percentages of the BrdU positive cells in sh-CDC20 group and sh-NC+SM04690 group were significantly decreased （P<0.05）， the percentages of the cells at G₂/M phase were significantly increased （P<0.05）， and the expression levels of β-catenin， c-Myc， and cyclin D1 proteins were significantly decreased （P<0.05）. Compared with sh-CDC20 group， the proliferation activity and percentage of BrdU positive cells in sh-CDC20+SM04690 group were significantly decreased （P<0.05）， the percentage of the cells at G₂/M phase was significantly increased （P<0.05）， and the expression levels of β-catenin， c-Myc， and cyclin D1 proteins in the cells were significantly decreased （P<0.05）. Conclusion CDC20 is highly expressed in the EC cells. Silencing CDC20 may inhibit the cell proliferation by inducing G₂/M phase arrest in the RL95-2 cells through the regulation of Wnt/β-catenin signal transduction.KEYWODS Endometrial cancer； Cell division cycle protein 20； Cell cycle； Cell proliferation； Wnt/β-catenin signaling pathway

中图分类号:

R737.33

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