FOXP3调控非小细胞肺癌A549细胞对阿霉素敏感性的作用及其机制

doi:10.13481/j.1671-587X.20230508

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨叉头蛋白3（FOXP3）基因沉默后非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞对阿霉素（Dox）敏感性的变化，阐明其参与Dox耐药的机制。方法采用脂质体法将FOXP3小干扰RNA（siRNA）片段转染至人NSCLC A549细胞，细胞分为空白对照组（不转染）、si-NC组（转染对照siRNA）和si-FOXP3组（转染FOXP3-siRNA）。采用Western blotting法和免疫荧光法检测各组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平，CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性和半数抑制浓度（IC₅₀）值。各组A549细胞中分别加入0、10和20 μmol·L^－1 DAPT，作为0、10和20 μmol·L^－1 DAPT组；另取A549细胞，分别加入0 μmol·L^－1 DAPT、1.0 mg·L^－1 Dox和1.0 mg·L^－1 Dox联合10 μmol·L^－1 DAPT，作为0 μmol·L^－1 DAPT组、1.0 mg·L^－1 Dox组和1.0 mg·L^－1 Dox联合10 μmol·L^－1 DAPT组。Western blotting法检测各组细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平，CCK-8和Western blotting法检测0、10和20 μmol·L^－1 DAPT组A549细胞的IC₅₀值和细胞中Notch1、Hes1及FOXP3蛋白表达水平，Western blotting法检测0 μmol·L^－1 DAPT组、1.0 mg·L^－1 Dox组和1.0 mg·L^－1 Dox联合10 μmol·L^－1 DAPT组A549细胞中FOXP3、P-糖蛋白（P-gp）、Notch1和Hes1蛋白表达水平。结果与空白对照和si-NC组比较，si-FOXP3组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平明显降低（P<0.01），增殖活性和IC₅₀值降低（P<0.05或P<0.01），细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。与0 μmol·L^－1 DAPT组比较，10 和20 μmol·L^－1 DAPT组A549细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。与0 μmol·L^－1 DAPT组比较，1.0 mg·L^－1 Dox组A549细胞中FOXP3、P-gp、Notch1和Hes1蛋白表达水平明显升高（P<0.01）；与1.0 mg·L^－1 Dox组比较，1.0 mg·L^－1 Dox联合10 μmol·L^－1 DAPT组A549细胞中FOXP3、P-gp、Notch1和Hes1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。结论沉默FOXP3可提高NSCLC细胞对Dox的敏感性，其作用机制与抑制Notch1/Hes1信号通路有关。

关键词: 癌，非小细胞肺, 叉头蛋白3, Notch1, 阿霉素, 药物敏感性

Abstract:

Objective To discuss the change of sensitivity of the non-small-cell lung cancer （NSCLC） A549 cells to doxorubicin （Dox） after silencing forkhead protein 3 （FOXP3） gene，and to clarify its mechanism involved in Dox resistance. Methods The human NSCLC A549 cells were transfected with FOXP3 small interfering RNA（siRNA ）by lipofectamine method. The cells were divided into blank control group （without transfection）， si-NC group （transfected with control-siRNA）， and si-FOXP3 group （transfected with FOXP3-siRNA）. Western blotting and immunofluorescence methods were used to detect the expression levels of FOXP3 protein in the A549 cells in various groups；the proliferation activities and half-maximal inhibitory concentration （IC₅₀） values of the A549 cells in various groups were detected by CCK-8 method. The A549 cells were treated with 0， 10， and 20 μmol·L^－1 DAPT， and regarded as 0， 10， and 20 μmol·L^－1 DAPT groups， respectively. Additionally， the A549 cells were treated with 0 μmol·L^－1 DAPT， 1.0 mg·L^－1 Dox， and 1.0 mg·L^－1 Dox combined with 10 μmol·L^－1 DAPT， and regarded as 0 μmol·L^－1 DAPT， 1.0 mg·L^－1 Dox， and 1.0 mg·L^－1 Dox combined with 10 μmol·L^－1 DAPT groups， respectively. Western blotting method was used to detect the expression levels of Notch1，Hes1， and FOXP3 proteins in the A549 cells in various groups； the IC₅₀ values and expression levels of Notch1， Hes1， and FOXP3 proteins in the A549 cells in 0， 10， and 20 μmol·L^－1 DAPT groups were detected by CCK-8 and Western blotting methods；the expression levels of FOXP3， P-glycoprotein（P-gp）， Notch1， and Hes1 proteins in the A549 cells in 0 μmol·L^－1 DAPT， 1.0 mg·L^－1 Dox， and 1.0 mg·L^－1 Dox combined with 10 μmol·L^－1 DAPT groups were detected by Western blotting method. Results Compared with blank control and si-NC groups， the expression level of FOXP3 protein in the A549 cells in si-FOXP3 group was significantly decreased （P<0.01）， the proliferative activity and IC₅₀ value were decreased （P<0.05 or P<0.01），and the expression levels of Notch1，Hes1 and FOXP3 proteins were significantly decreased （P<0.01）. Compared with 0 μmol·L^－1 DAPT group， the expression levels of Notch1， Hes1， and FOXP3 proteins in the A549 cells in 10 and 20 μmol·L^－1 DAPT groups were significantly decreased （P<0.01）. Compared with 0 μmol·L^－1 DAPT group， the expression levels of FOXP3， P-gp， Notch1， and Hes1 proteins in the A549 cells in 1.0 mg·L^－1 Dox group were significantly increased （P<0.01）. Compared with 1.0 mg·L^－1 Dox group， the expression levels of FOXP3， P-gp， Notch1， and Hes1 proteins in the A549 cells in 1.0 mg·L^－1 Dox combined with 10 μmol·L^－1 DAPT group were significantly decreased （P<0.01）. Conclusion Silencing FOXP3 can enhance the sensitivity of the NSCLC cells to Dox， and its mechanism is related to the inhibition of the Notch1/Hes1 signaling pathway.

Key words: Cancer，non small-cell lung, Forkhead box protein 3, Notch1, Doxorubicin, Drug sensitivity

中图分类号:

R734.2

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图/表 5

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