人成纤维细胞生长因子-21基因的克隆表达及蛋白的纯化

J4 ›› 2010, Vol. 36 ›› Issue (1): 81-85.

人成纤维细胞生长因子-21基因的克隆表达及蛋白的纯化

王会岩^1,2, 田海山^1,2, 赵宏鑫^1,3, 张耀方¹, 万晓姗¹, 邵明龙¹, 杨苹¹, 肖业臣¹, 李校堃¹

（1.吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心,吉林长春 130118;2.吉林农业大学生命科学学院,吉林长春 130118;3.吉林农业大学中药材学院|吉林长春130118）

收稿日期:2009-09-22 出版日期:2010-01-28 发布日期:2010-01-28
通讯作者: 肖业臣 E-mail:（Tel:0431-84533327,E-mail:yechenxiao2400@126.com）；李校堃（Tel:0431-84533348,E-mail:xiaokunli@163.net）
作者简介:王会岩（1968-）|女|吉林省吉林市人|在读农学博士|主要从事生物反应器与基因工程药物研究。
基金资助:
吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题（20080712，20090249）；吉林省长春净月科技三项费用项目资助课题（2008B003）

Cloning and expression of human FGF21 gene and purification of recombinant protein

WANG Hui-Yan^1,2, TIAN Hai-Shan^1,2, ZHAO Hong-Xin^1,3, ZHANG Yao-Fang¹, WAN Xiao-Shan¹, SHAO Meng-Long¹, YANG Peng^1,3, XIAO Ye-Chen¹, LI Xiao-Kun¹

(1.Engineering Research Center of Bioreactor and Pharmaceutical Development,Ministry of Education,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China;2.College of Life Sciences,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China;3.College of Traditional Chinese Medicine,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China)

Received:2009-09-22 Online:2010-01-28 Published:2010-01-28

摘要/Abstract

摘要：

目的：构建和表达人成纤维细胞生长因子-21（FGF21）的基因工程菌，为治疗2型糖尿病的新药开发提供实验数据。方法：通过PCR方法，以质粒pET20b-FGF21为模板扩增FGF21全长，将其与分子伴侣SUMO相融合，再将该融合基因与原核表达载体pET20b连接后转化至BL21（Rosetta）宿主细胞中，通过IPTG诱导获得可溶性表达。将融合蛋白经Ni-NTA、分子筛等进行纯化，获得的蛋白纯度在95%以上。结果：经酶切和基因测序证实获得的FGF21基因序列与GenBank（登录号NM019113）报道的完全一致，构建的pET20b-SUMO-FGF21表达载体在BL21大肠杆菌中成功表达FGF21蛋白，蛋白表达量在15%以上，经SDS-PAGE证实其相对分子质量为19 401，与理论预期值相符。Western blotting 分析该表达产物与人FGF21多克隆抗体具有特异性结合能力,经SUMO酶酶切后获得纯度大于95%以上的纯蛋白。结论：成功构建表达人FGF21融合蛋白的基因工程菌，经IPTG诱导、Ni-NTA、分子筛等进行纯化后获得了FGF21纯蛋白。

关键词: 成纤维细胞生长因子21;pET-20b;小泛素相关修饰蛋白质类

Abstract:

Abstract:Objective
To establish E.coli strain and express human fibroblast growth factor 21(FGF21),and provide experimental foundation for development of new drugs for treatment of type 2 diabetes.Methods Human FGF21 gene fragments were obtanined by PCR.After the FGF21 was fused with SUMO (small ubiquitin-related modifier) by PCR,the fused gene was expressed in E.coli BL21(Rosetta).By inducing high levels of expression with IPTG,the soluble proteins were obtanined.The fused protein was purified by DEAE Sepharose and Ni-NTA affinity chromatography.Once cleaved from SUMO,the purity of human FGF21 by SDS-PAGE was shown to be higher than 95%.Results Acquired gene fragments of hFGF21 were identified by digestion and DNA sequencing with the human FGF21 reported in GenBank (Accession no.NM019113 ).The recombinant vector of pET20b-SUMO-FGF21 was constructed successfully.SDS-PAGE result proved that SUMO-FGF21 fusion protein with a relative molecular mass of about 19 401 was expressed.Western blotting result showed that the expressed products had specific reaction with anti-human FGF21 polyclonal antibody.Conclusion The engineering E.coli strain expressing human FGF21 fusion protein is successfully established and the purified protein is obtained.

Key words: fibroblast growth , factor 21;pET-20b;small ubiquitin-related modifier proteins

中图分类号:

王会岩, 田海山, 赵宏鑫, 张耀方, 万晓姗, 邵明龙, 杨苹, 肖业臣, 李校堃. 人成纤维细胞生长因子-21基因的克隆表达及蛋白的纯化[J]. J4, 2010, 36(1): 81-85.

WANG Hui-Yan, TIAN Hai-Shan, ZHAO Hong-Xin, ZHANG Yao-Fang, WAN Xiao-Shan, SHAO Meng-Long, YANG Peng, XIAO Ye-Chen, LI Xiao-Kun. Cloning and expression of human FGF21 gene and purification of recombinant protein[J]. J4, 2010, 36(1): 81-85.

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