真菌胞内蛋白质提取方法的建立

J4 ›› 2012, Vol. 38 ›› Issue (3): 590-594.

真菌胞内蛋白质提取方法的建立

王爽^1,2|姜兰香¹|张宇^2,3| 贺丹²|田庄²|高嵩²| 横山耕治⁴| 王丽^2

1.吉林大学第二医院皮肤科|吉林长春 130041； 2.吉林大学白求恩医学院病原生物学系|吉林长春 130021；3.吉林大学第二医院检验科|吉林长春 130041；4.日本千叶大学真菌研究中心,日本千叶 260-8673

收稿日期:2011-08-15 出版日期:2012-05-28 发布日期:2012-05-28
通讯作者: 王丽（Tel: 0431-85619486,E-mail: wli99@jlu.edu.cn） E-mail:E-mail: wli99@jlu.edu.cn
作者简介:王爽（1976-）|女|吉林省长春市人|主治医师|医学博士|主要从事真菌分子学鉴定及耐药机制的研究。
基金资助:
国家自然科学基金资助课题（30910103903，30770120）

Establishment of intracellular protein extraction methods from fungus

WANG Shuang ^1,2,JING Lan-xiang¹|ZHANG Yu ^2,3,HE Dan ²,TIAN Zhuang ²,GAO Song ²,KOJI Yokoyama ⁴, WANG Li ²

^{1.Department of Dermatology,Second Hospital,Jilin University,Changchun 130041,China;2.Department of Pathogen Biology,Norman Bethune College of Medicine,Jilin University,Changchun 130021,China;3.Department of |Laboratory,Second Hospital,Jilin University,Changchun 130041,China;4.Medical Mycology Research Center,Chiber University,Chiba 260-8673,Japan}

Received:2011-08-15 Online:2012-05-28 Published:2012-05-28

摘要/Abstract

摘要：

目的：研究不同的提取方法对白假丝酵母和茄病镰刀菌胞内蛋白质浓度、种类及数量的影响，为建立一种稳定可靠的真菌胞内蛋白质提取方法提供依据。方法：分别以白假丝酵母菌和茄病镰刀菌为研究对象，培养时间为36、48和72 h，超声波工作时间为20 s、3 min、5 min，10 min，超声波功率为332.5和475.0 W，通过蛋白质浓度检测和SDS-PAGE蛋白质电泳分析，比较不同条件下提取的蛋白质浓度、种类及数量，观察不同因素对蛋白质提取效果的影响。结果：2株真菌均在培养36 h时提取胞内蛋白质的浓度最大，白假丝酵母在功率332.5 W、超声3 min时得到胞内蛋白质的数量和种类最多，茄病镰刀菌在功率332.5 W、超声10 min时得到蛋白质的数量和种类最多。结论：使用超声波法与玻璃珠研磨法结合提取胞内蛋白质，从菌株的培养时间、超声波工作时间和功率3方面建立了真菌胞内蛋白质的最佳提取方法。

关键词: 白假丝酵母;茄病镰刀菌;超声波;培养时间

Abstract:

Objective
To study the effect of different cultivate time,ultrasonic time and ultrasonic power on the concentration,type and quantity of the intracellular protein from Candida albicans and Fusarium solina and to provide the theoretical basis for establishing a reliable and stable extraction method for intracellular protein from fungus.Methods Candida albicans and Fusarium solina were cultured.The different parameters included the culture time(36,48,and 72 h),ultrasonic time(20 s,3 min,5 min,and 10 min) and ultrasonic power(332.5 W and 475.0 W).The concentrations,species and quantities of protein under different factors were detected by the protein concentration detection and SDS-PAGE electrophoresis analysis.Results Both strains got the most quantity of protein when cultivated for 36 h.The most quantity and species of Candida albicans were obtained when the ultrasonic power was 332.5 W and ultrasonic time was 3 min,but as to Fusarium solina,the corresponding parameters were 332.5 W and 10 min, respectively.Conclusion The intracellular protein is extracted by compositely using ultrasonic method and glass bead transformation method.The optimal extraction method of intracellular protein from fungus is developed from the aspects of culture time,ultrasonic power and ultrasonic working time of strains.

Key words: Candida albicans;Fusarium solani;ultrasound;culture time

中图分类号:

王爽|姜兰香|张宇| 贺丹|田庄|高嵩| 横山耕治| 王丽. 真菌胞内蛋白质提取方法的建立[J]. J4, 2012, 38(3): 590-594.

WANG Shuang,JING Lan-xiang,ZHANG Yu,HE Dan,TIAN Zhuang,GAO Song,KOJI Yokoyama,. Establishment of intracellular protein extraction methods from fungus[J]. J4, 2012, 38(3): 590-594.

[1]	周颖,高孟飞,朱慧勇. 间充质干细胞干性维持信号通路的研究进展[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 638-642.
[2]	李红，陈永浩，龚红君. 右美托咪定对肾癌根治术患者围术期炎性细胞因子和肾功能的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 588-591.
[3]	李海波，刘行，孙美花,梁建民. 孕期至幼年期低水平铅暴露仔鼠海马锌离子平衡的变化及其发育期海马神经元的损伤[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 521-528.
[4]	谢波，沈梅，叶文鑫，舒彦，梁臻，张心男. 依帕司他联合行为疗法治疗女性糖尿病膀胱的临床疗效评价[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 597-600.
[5]	李辉,赵丽晶,杜宇,杨铁铮，李国峰,陈亮,支晨阳,李娜,周建华. 结肠安栓联合舒血宁对溃疡性结肠炎大鼠的治疗作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 488-493.
[6]	张洪长，王恩鹏，陈新，唐燕，王洪鑫，王炫策，许新. 人参皂苷Re对UVC辐射损伤细胞的保护作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 507-511.
[7]	武国东，王素侠，及志勇，张舒岩. 急性心力衰竭大鼠B型钠尿肽水平与肝功能的关系[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 517-520.
[8]	陈宣男，全首祯. NDM1基因常规PCR与荧光定量PCR检测方法的建立及其检测结果比较[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 625-629.
[9]	周超熙,于滨,赵斌,马志强,赵文河,于跃明. 直肠癌环周切缘病理学检测判断中低位直肠癌患者预后的临床价值[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 601-604.
[10]	周广宇，韩雪梅，金玲. 神经精神狼疮患者影像学表现与自身抗体水平和预后的关系[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 609-614.
[11]	周建英，田勇韩青,贺庆,程凯亮,李幼琼. 影像学三维重建技术在寰椎立体模型建立及性别鉴定中的应用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 605-608.
[12]	沈煜，沈惠良，方秀统. 老年股骨颈骨折患者关节置换术后死亡危险因素分析[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 574-577.
[13]	王宗谦，卢新星. 终末期肾病患者抑郁程度与生存质量各个维度之间的关系[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 615-619.
[14]	李树春，王槐. 影响美托洛尔治疗效果的药物基因组学研究进展[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(2): 423-426.
[15]	胡源，贾卉，姜瑞，李京，刘涛涛. 不同验光方法对中年患者屈光状态的检测及其临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(2): 363-366.