人lncRNA-GACAT2 过表达载体的构建及其对肺癌细胞增殖和干性的影响

doi:10.13481/j.1671-587X.20230506

吉林大学学报(医学版) ›› 2023, Vol. 49 ›› Issue (5): 1147-1153.doi: 10.13481/j.1671-587X.20230506

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人lncRNA-GACAT2 过表达载体的构建及其对肺癌细胞增殖和干性的影响

倪娜¹,董洪亮¹,高海洋²,陈微微¹,孟新宇¹,崔冰洁¹,杜静¹()

^1.滨州医学院附属医院医学研究中心，山东滨州 256603
^2.滨州医学院附属医院急诊重症监护室，山东滨州 256603

收稿日期:2022-11-15 出版日期:2023-09-28 发布日期:2023-10-26
通讯作者: 杜静 E-mail:djedith@126.com
作者简介:倪娜（1985－），女，山东省滨州市人，主管技师，医学硕士，主要从事长非编码RNA在肺癌发生和转移中作用机制方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金青年基金项目(31900441);山东省科技厅自然科学基金面上项目(ZR2019MC026);山东省科技厅自然科学基金青年基金项目(ZR2022QH192);山东省卫健委中医药发展计划项目(2019-0514);山东省泰山学者青年专家、齐鲁卫生与健康杰出青年人才和滨州市外专双百项目(wzz019-01)

Construction of human lncRNA-GACAT2 over-expression vector and its effect on proliferation and stemness of lung cancer cells

Na NI¹,Hongliang DONG¹,Haiyang GAO²,Weiwei CHEN¹,Xinyu MENG¹,Bingjie CUI¹,Jing DU¹()

^1.Medical Research Center，Affiliated Hospital，Binzhou Medical University，Binzhou 256603，China
^2.Emergency Intensive Care Unit，Affiliated Hospital，Binzhou Medical University，Binzhou 256603，China

Received:2022-11-15 Online:2023-09-28 Published:2023-10-26
Contact: Jing DU E-mail:djedith@126.com

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨长链非编码RNA （lncRNA）胃癌相关转录本2（GACAT2）基因对肺癌A549和H1299细胞增殖和干性的影响，阐明lncRNA GACAT2基因在肺癌发生发展中的作用。方法实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法扩增lncRNA GACAT2基因的全长序列，克隆至pc3.1（+）真核表达载体，采用菌液PCR法和基因测序法检测GACAT2过表达载体的构建情况。将pc3.1-GACAT2过表达质粒和对照质粒pc3.1分别转入人肺癌A549和H1299细胞，采用G418筛选并建立稳定过表达GACAT2的A549和H1299细胞，分为空载体组（转染pc3.1空载体）和pc3.1-GACAT2组（转染pc3.1-GACAT2重组质粒）。采用RT-qPCR法检测2组A549和H1299细胞中GACAT2 mRNA表达水平， CCK-8法检测2组细胞增殖活性，细胞克隆形成实验检测各组细胞克隆形成数，干细胞成球实验观察2组细胞成球数。结果成功构建GACAT2真核过表达载体。与空载体组比较，pc3.1-GACAT2组A549和H1299细胞中GACAT2 mRNA表达水平升高（P<0.05或P<0.01），细胞增殖活性降低（P<0.05或P<0.01），细胞克隆形成数明显降低（P<0.05或P<0.01），细胞成球数明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论过表达人lncRNA GACAT2基因能抑制肺癌A549和H1299细胞的增殖能力和细胞干性。

关键词: 肺肿瘤, 长链非编码RNA, GACAT2基因, 细胞增殖, 细胞干性

Abstract:

Objective To discuss the effect of long non-coding RNA （lncRNA） gastric cancer related transcript 2（GACAT2） gene on the proliferation and stemness of the lung cancer A549 and H1299 cells， and to clarify the effect of lncRNA GACAT2 gene on the occurrence and development of lung cancer. Methods The full-length sequence of lncRNA GACAT2 gene was amplified by real-time fluorescence quantitative PCR （RT-qPCR） method， and was cloned into the pc3.1 （+） eukaryotic expression vector. The construction of GACAT2 over-expression vector was confirmed by bacterial liquid PCR method and gene sequencing. The pc3.1-GACAT2 over-expression plasmid and control plasmid pc3.1 were separately transfected into the human lung cancer A549 and H1299 cells. The A549 and H1299 cells with stable over-expression of GACAT2 were established by G418 screening， and the cells were divided into blank vector group （transfected with pc3.1 empty vector） and pc3.1-GACAT2 group （transfected with pc3.1-GACAT2 recombinant plasmid）. RT-qPCR method was used to detect the expression levels of GACAT2 mRNA in the A549 and H1299 cells in two groups；CCK-8 assay was used to detect the proliferation activities of the cells in two groups； cell clone formation assay was used to detect the clone formation numbers of the cells in two groups； stem cell sphere formation experiment was used to detect the sphere formation numbers of the A549 and H1299 cells in two groups. Results The eukaryotic over-expression vector of GACAT2 was successfully constructed. Compared with blank vector group， the expression levels of GACAT2 mRNA in the A549 and H1299 cells in pc3.1-GACAT2 group were increased （P<0.05 or P<0.01）， the cell proliferation activities were decreased （P<0.05 or P<0.01），the clone formation numbers were decreased （P<0.05 or P<0.01）， and the sphere formation numbers were decreased （P<0.05 or P<0.01）. Conclusion Over-expression of human lncRNA GACAT2 gene can inhibit the proliferation and stemness of the lung cancer A549 and H1299 cells.

Key words: Lung neoplasm, Long non-coding RNA, Gastric cancer related transcript 2, Cell proliferation, Cell stemness

中图分类号:

倪娜,董洪亮,高海洋,陈微微,孟新宇,崔冰洁,杜静. 人lncRNA-GACAT2 过表达载体的构建及其对肺癌细胞增殖和干性的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(5): 1147-1153.

Na NI,Hongliang DONG,Haiyang GAO,Weiwei CHEN,Xinyu MENG,Bingjie CUI,Jing DU. Construction of human lncRNA-GACAT2 over-expression vector and its effect on proliferation and stemness of lung cancer cells[J]. Journal of Jilin University(Medicine Edition), 2023, 49(5): 1147-1153.

图/表 4

参考文献 24

1	VAN MEERBEECK J P， FENNELL D A， DE RUYSSCHER D K. Small-cell lung cancer ［J］. Lancet， 2011， 378 （9804）： 1741-1755.
2	NASIM F， SABATH B F， EAPEN G A. Lung cancer［J］. Med Clin N Am， 2019， 103（3）： 463-473.
3	CATALDO V D， GIBBONS D L， PÉREZ-SOLER R， et al. Treatment of non-small-cell lung cancer with erlotinib or gefitinib［J］. N Engl J Med， 2011， 364（10）： 947-955.
4	PAO W， GIRARD N. New driver mutations in non-small-cell lung cancer［J］. Lancet Oncol， 2011， 12（2）： 175-180.
5	SUN J X， SONG Y X， CHEN X W， et al. Novel long non-coding RNA RP11-119F7.4 as a potential biomarker for the development and progression of gastric cancer［J］. Oncol Lett， 2015， 10（1）： 115-120.
6	LI D J， YANG C F， YIN C， et al. LncRNA， important player in bone development and disease［J］. Endocr Metab Immune Disord Drug Targets，2020，20（1）：50-66.
7	JIANG Z F， ZHANG L. LncRNA： a potential research direction in intestinal barrier function［J］. Dig Dis Sci， 2021， 66（5）： 1400-1408.
8	HOSSEINI E， BAGHERI-HOSSEINABADI Z， DE TOMA I， et al. The importance of long non-coding RNAs in neuropsychiatric disorders［J］. Mol Aspects Med， 2019， 70： 127-140.
9	CHEN Z Y， LEI T Y， CHEN X， et al. Long non-coding RNA in lung cancer［J］. Clin Chim Acta， 2020， 504： 190-200.
10	LI J， MENG H， BAI Y， et al. Regulation of lncRNA and its role in cancer metastasis［J］. Oncol Res， 2016， 23（5）： 205-217.
11	ZHANG Y C， LIANG D， JIN J， et al. Progress of long non-coding RNA in non-small cell lung cancer［J］. Zhongguo Fei Ai Za Zhi， 2018， 21（1）： 43-49.
12	DONG H L， ZENG L L， WU Y， et al. SOX2-OT/SOX2 axis regulates lung cancer H520 cell migration via Gli1-mediated epithelial-mesenchymal transition［J］.J Southern Med Uni， 2022， 42（10）： 1431-1439.
13	XIAN H P， ZHUO Z L， SUN Y J， et al. Circulating long non-coding RNAs HULC and ZNFX1-AS1 are potential biomarkers in patients with gastric cancer［J］. Oncol Lett， 2018， 16（4）： 4689-4698.
14	XIE X， LIU H T， MEI J， et al. LncRNA HMlincRNA717 is down-regulated in non-small cell lung cancer and associated with poor prognosis［J］. Int J Clin Exp Pathol， 2014， 7（12）： 8881-8886.
15	CHEN W W， AN J J， GUO J W， et al. Sodium selenite attenuates lung adenocarcinoma progression by repressing SOX2-mediated stemness［J］. Cancer Chemother Pharmacol， 2018， 81（5）： 885-895.
16	SHAO Y F， CHEN H L， JIANG X M， et al. Low expression of lncRNA-HMlincRNA717 in human gastric cancer and its clinical significances［J］. Tumour Biol， 2014， 35（10）： 9591-9595.
17	TAN L， YANG Y B， SHAO Y F， et al. Plasma lncRNA-GACAT2 is a valuable marker for the screening of gastric cancer［J］. Oncol Lett， 2016， 12（6）： 4845-4849.
18	LI X， TIAN B M， DENG D K， et al. LncRNA GACAT2 binds with protein PKM1/2 to regulate cell mitochondrial function and cementogenesis in an inflammatory environment［J］.Bone Res，2022，10（1）： 29.
19	YANG Q， WAN Q， ZHANG L T， et al. Analysis of lncRNA expression in cell differentiation［J］. RNA Biol， 2018， 15（3）： 413-422.
20	BARBATO L， BOCCHETTI M， DI BIASE A， et al. Cancer stem cells and targeting strategies［J］. Cells， 2019， 8（8）： 926.
21	ZHAN Y H， CHEN Z C， HE S M， et al. Long non-coding RNA SOX2OT promotes the stemness phenotype of bladder cancer cells by modulating SOX2［J］. Mol Cancer， 2020， 19（1）： 25.
22	CHEN P Y， HSIEH P L， PENG C Y， et al. LncRNA MEG3 inhibits self-renewal and invasion abilities of oral cancer stem cells by sponging miR-421［J］. J Formos Med Assoc， 2021， 120（4）： 1137-1142.
23	ZAGORAC S， DE GIORGIO A， DABROWSKA A， et al. SCIRT lncRNA restrains tumorigenesis by opposing transcriptional programs of tumor-initiating cells［J］. Cancer Res， 2021， 81（3）： 580-593.
24	WANG R， DONG H X， ZENG J， et al. LncRNA DGCR5 contributes to CSC-like properties via modulating miR-330-5p/CD44 in NSCLC［J］. J Cell Physiol， 2018， 233（9）： 7447-7456.

[1]	王丹丹,周宁,刘冬芹,赵杰,梁超,代娟娟,武艳. MiR-491-5p过表达对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(5): 1134-1139.
[2]	靳莉,张小红,胡朝阳,李凤芝,崔永亮,李杨,刘倩倩,乔艳俊. 槲皮素对人肺癌A549细胞移植瘤模型小鼠移植瘤生长和肺转移及细胞侵袭和迁移的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(4): 1018-1026.
[3]	梁媛媛,赵颂,胡静,安妮,魏验芦,苏荣健. 莫特塞尼与EZH2抑制剂GSK126联合应用对肝癌Huh7细胞增殖和凋亡的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(4): 896-904.
[4]	宋远瑛,阚竞,彭坤,李悦. 金银花提取物对哮喘模型小鼠气道平滑肌细胞增殖和凋亡的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(4): 1001-1007.
[5]	高昶,刘燕,杨皓翔,张翠翠. 长链非编码RNA MALAT1对氧糖剥夺/复氧诱导的人脑微血管内皮细胞血管生成的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(4): 832-839.
[6]	刘蒙,黄晓东,韩峥,朱庆曦,谭洁,田霞. 钙黏蛋白17对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其PI3K/AKT/mTOR信号通路调节机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(4): 1008-1017.
[7]	徐菱遥,魏书堂,董勇,孙正路,赵俊波,韩大正. lncRNA MALAT1对肝星状细胞活化的调节作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(3): 697-705.
[8]	苗卉,苗聪秀,李娜,韩晶. lncRNA HAND2-AS1通过调节miR-21表达对子宫内膜异位症患者子宫内膜基质细胞迁移和侵袭的抑制作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(3): 733-741.
[9]	闫圣玉,刘昌化,许志杰,丁雅婷,谢亚锋,张侨,刘菀莹. lncRNA PAX8-AS1对结直肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭的作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(3): 656-664.
[10]	张舒雅,孙洪英,毛戬,孟晨曦,巴格隆. circ_EFCAB2在癫痫细胞模型中的表达及其作用机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(3): 691-696.
[11]	薛姣姣,郝磊,张毓秀,代贺阳,张丽霞,郭少伟,张晶晶,李阳,李庆霞. 槐耳清膏对乳腺癌他莫昔芬耐药细胞的影响及其作用机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(3): 714-721.
[12]	孙逸飞,李迪诺,王玉彬. 姜黄素通过下调PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白表达对胃癌MGC-803细胞增殖和侵袭的抑制作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(2): 332-340.
[13]	刘韵鹏,刘子豪,康伯铭,杨志广. LncRNA SNHG17通过miR-384靶向AEG1对非小细胞肺癌细胞生物学行为的调控作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(2): 298-307.
[14]	王开,黄汉. 阿托伐他汀对人舌鳞癌CAL-27细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(2): 324-331.
[15]	孙利军,冯杰,刘小明,任广伟,阮琳. ADAM10在人动静脉内瘘狭窄处血管组织中的表达及其对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(2): 482-491.

人lncRNA-GACAT2 过表达载体的构建及其对肺癌细胞增殖和干性的影响

Construction of human lncRNA-GACAT2 over-expression vector and its effect on proliferation and stemness of lung cancer cells

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