丹皮酚对人骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移和CXCR4/STAT3通路的影响

doi:10.13481/j.1671-587X.20230513

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨丹皮酚对人骨肉瘤（OS）MG-63细胞增殖、迁移和趋化因子受体4（CXCR4）/信号传导与转录激活因子3（STAT3）通路的影响，并阐明其可能的作用机制。方法体外培养MG-63细胞，分为对照组（不给予药物干预）和不同浓度丹皮酚组（给予10、20、40、80、160和320 mg·L^－1丹皮酚）。采用CCK-8法检测各组细胞存活率并选择半数抑制浓度（IC₅₀）值作为后续实验药物浓度。将MG-63细胞分为对照组和丹皮酚（215.8 mg·L^－1）组，采用Western blotting法检测各组细胞中CXCR4、白细胞介素6（IL-6）、磷酸化STAT3（p-STAT3）和STAT3蛋白表达水平。将MG-63细胞分为对照组（不给予药物干预）、丹皮酚组（给予215.8 mg·L^－1丹皮酚）、丹皮酚+空载组（给予215.8 mg·L^－1丹皮酚+空载质粒）和丹皮酚+过表达组（给予215.8 mg·L^－1丹皮酚+CXCR4过表达质粒）。采用细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率，克隆形成实验检测各组细胞克隆形成率，Western blotting法检测各组细胞中CXCR4、IL-6、p-STAT3和STAT3蛋白表达水平。结果与对照组比较，40、80、160和320 mg·L^－1丹皮酚组MG-63细胞存活率降低（P<0.05），丹皮酚IC₅₀值为215.8 mg·L^－1。与对照组比较，丹皮酚（215.8 mg·L^－1）组MG-63细胞中CXCR4、IL-6和p-STAT3蛋白表达水平降低（P<0.05）。与对照组比较，丹皮酚组和丹皮酚+空载组MG-63细胞划痕愈合率及细胞克隆形成率降低（P<0.05），细胞中CXCR4、IL-6和p-STAT3蛋白表达水平降低（P<0.05）；与丹皮酚组比较，丹皮酚+空载组MG-63细胞划痕愈合率、细胞克隆形成率和细胞中CXCR4、IL-6、p-STAT3及STAT3蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）；与丹皮酚组比较，丹皮酚+过表达组MG-63细胞划痕愈合率和细胞克隆形成率升高（P<0.05），细胞中CXCR4、IL-6和p-STAT3蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论丹皮酚能抑制MG-63细胞的增殖、迁移和克隆形成，其机制可能与调控CXCR4/STAT3信号通路有关。

关键词: 丹皮酚, 人骨肉瘤细胞, 细胞增殖, 趋化因子受体4, 信号传导与转录激活因子3

Abstract:

Objective To discuss the effect of paeonol on the proliferation， migration and chemokinereceptor4 （CXCR4）/signal transducer and activators of transcription3 （STAT3） pathway of the human osteosarcoma（OS ） MG-63 cells， and to clarify its possible mechanism. Methods The MG-63 cells were cultured in vitro and divided into control group （without drug intervention） and different concentrations of paeonol groups （given 10， 20， 40， 80， 160，and 320 mg·L^－1 paeonol， respectively）.The survival rates of the MG-63 cells in various groups were detected by CCK-8 method and the half inhibitory concentration （IC₅₀） value was selected as the drug concentration for subsequent experiment. The MG-63 cells were divided into control group（without drug treatment） and paeonol group（given 215.8 mg·L^－1 paeonal）.The expression levels of CXCR4， interleukin 6 （IL-6），and phosphorylated STAT3 （p-STAT3），and STAT3 proteins in the MG-63 cells in various groups were detected by Western blotting method.The MG-63 cells were divided into control group， paeonol group， paeonol+empty group （given 215.8 mg·L^－1 paeonol+empty plasmid）， and paeonol+overexpression group （given 215.8 mg·L^－1 paeonol+CXCR4 over-expression plasmid）. The scratch healing rates of the MG-63 cells in various groups were detected by cell scratch experiment， the clone formation rates the MG-63 cells in various groups were detected by cloning formation experiment， and the expression levels of CXCR4， IL-6， p-STAT3， and STAT3 proteins in the MG-63 cells in various groups were detected by Western blotting method. Results Compared with control group， the survival rates of the MG-63 cells treated in 40， 80， 160， and 320 mg·L^－1 paeonol groups were decreased （P<0.05）， and the IC₅₀ value of paeonol was 215.8 mg·L^－1. Compared with control group， the expression levels of CXCR4， IL-6， and p-STAT3 proteins in the MG-63 cells in paeonol group were decreased （P<0.05）. Compared with control group， the scratch healing rates and clone formation rates of the MG-63 cells in paeonol group and paeonol+empty group were decreased （P<0.05）， and the expression levels of CXCR4， IL-6，and p-STAT3 proteins in the MG-63 cells were decreased （P<0.05）； compared with paeonol group，the scratch healing rate， clone formation rate， expression levels of CXCR4， IL-6， p-STAT3，and STAT3 proteins in the MG-63 cells in paeonol+empty group had no significant differences（P>0.05）； compared with paeonol group， the scratch healing rate and clone formation rate of the MG-63 cells in paeonol+overexpression group were increased （P<0.05）， and the expression levels of CXCR4， IL-6 and p-STAT3 proteins were increased （P<0.05）. Conclusion Paeonol can inhibit the proliferation， migration，and clonogenic ability of the MG-63 cells， and its mechanism may be related to the regulation of CXCR4/STAT3 signal pathway.

Key words: Paeonol, Human osteosarcoma cells, Cell proliferation, Chemokinereceptor 4, Signal transducer and activators of transcription 3

中图分类号:

R273

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