miR-431-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其靶向调控CTDP1基因表达机制

doi:10.13481/j.1671-587X.20220622

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨miR-431-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响，阐明其可能的分子机制。方法取经病理诊断确诊为胃癌的68例患者的胃癌组织及其癌旁组织。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测胃癌组织、癌旁组织和人正常胃黏膜上皮GES-1细胞、人胃癌细胞（MKN-28、MGC-803、MKN-45、SGC-7901和HGC-27）中miR-431-3p及羧基末端结构域磷酸酶1（CTDP1）mRNA表达水平，Western blotting法检测上述细胞中CTDP1蛋白和各组SGC-7901细胞中细胞色素C（Cyt C）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平。采用Pearson相关分析法分析miR-431-3p与CTDP1 mRNA表达水平的相关性，双荧光素酶报告基因实验检测miR-431-3p和CTDP1的靶向关系。将miR-431-3p mimic和CTDP1过表达慢病毒分别或同时转染至SGC-7901细胞中，将细胞分为空白组、空载过表达（mimic NC）组、miR-431-3p过表达（miR-431-3p mimic）组、空载慢病毒（Vector）组、CTDP1过表达慢病毒（CTDP1过表达）组和miR-431-3p mimic+CTDP1过表达（共转染）组。MTT法检测各组SGC-7901细胞增殖活性，克隆形成实验检测各组SGC-7901细胞单克隆形成数，流式细胞术检测各组SGC-7901细胞凋亡率。结果与癌旁组织比较，胃癌组织中miR-431-3p表达水平降低（P<0.01），CTDP1 mRNA表达水平升高（P<0.01），并且二者表达水平呈负相关关系（r=－0.316，P=0.009）。与GES-1细胞比较，其他5种胃癌细胞中miR-431-3p表达水平均降低（P<0.01），CTDP1 mRNA和蛋白表达水平均升高（P<0.05）。双荧光素酶报告系统，miR-431-3p靶向调控CTDP1表达。与空白组和mimic NC组比较，miR-431-3p组SGC-7901细胞中CTDP1和Bcl-2蛋白表达水平、细胞增殖活性和克隆形成数降低（P<0.05），细胞凋亡率和细胞中Cyt C及Bax蛋白表达水平升高（P<0.05）。与空白组和Vector组比较，CTDP1过表达组SGC-7901细胞中CTDP1和Bcl-2蛋白表达水平、细胞增殖活性及克隆形成数升高（P<0.05）；细胞凋亡率和细胞中Cyt C及Bax蛋白表达水平降低（P<0.05）。与空白组和miR-431-3p组比较，共转染组SGC-7901细胞中CTDP1和Bcl-2蛋白表达水平、细胞增殖活性及克隆形成数水平升高（P<0.05），细胞凋亡率和细胞中Cyt C及Bax蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论 miR-431-3p过表达能抑制人胃癌细胞增殖，并促进细胞凋亡，可能是与靶向下调CTDP1基因表达有关。

关键词: 胃肿瘤, miR-431-3p, 羧基末端结构域磷酸酶1, 细胞增殖, 细胞凋亡

Abstract:

Methods The gastric cancer tissue and the adjacent tissue of 68 patients with gastric cancer confirmed by pathological diagnosis were collected.The expression levels of miR-431-3p mRNA and carboxy-terminal domain phosphatase 1 （CTDP1） mRNA in gastric cancer tissue， adjacent tissue， human normal gastric mucosal epithelial GES-1 cells and human gastric cancer cells （MKN-28， MGC-803， MKN-45， SGC-7901， HGC-27 cells ）were detected by real-time fluorescence quantitative PCR （RT-qPCR） method；the expression levels of CTDP1 protein in the above cells and the expression levels of cytochrome C（Cyt C），B cell lymphoma-2 （Bcl-2）， and Bcl-2 associated X protein （Bax） in the SGC-7901 cells in various groups were detected by Western blotting method； the correlation between miR-431-3p and CTDP1 mRNA expression level was analyzed by Pearson correlation analysis；the targeting relationship between miR-431-3p and CTDP1 was detected by dual luciferase reporter gene experiment； the miR-431-3p mimic and CTDP1 over-expression lentivirus were transfected into the SGC-7901 cells separately or at the same time.The cells were divided into blank group， vector over-expression（mimic NC） group，miR-431-3p over-expression （miR-431-3p mimic） group，vector lentivirus（vector） group， CTDP1 over-expression lentivirus （CTDP over-expression）group and miR-431-3p mimic+CTDP1 over-expression （co-transfection） group.The proliferation activities of the cells in various groups were detected by MTT assay； the clone formation numbers of the SGC-7901 cells in various groups were detected by clone formation assay；the apoptotic rates of the SGC-7901 cells in various groups were detected by flow cytometry. Results Compared with the adjacent tissue， the expression level of miR-431-3p in the gastric cancer tissue was decreased （P<0.01），and the expression level of CTDP1 mRNA was increased （P<0.01）， and there was a negative correlation between them （r=－0.316， P=0.009）. Compared with the GES-1 cells， the expression levels of miR-431-3p in the other five kinds of gastric cancer cells were decreased （P<0.01）， and the expression levels of CTDP1 mRNA and protein were increased （P<0.05）. The results of dual luciferase reporter system showed that miR-431-3p targetedly regulated the expression of CTDP1. Compared with blank group and mimic NC group， the expression levels of CTDP1 and Bcl-2 proteins， proliferation activity，and number of clone formation of the SGC-7901 cells in miR-431-3p group were decreased （P<0.05）， while the apoptotic rate， expression levels of Cyt C and Bax proteins were increased （P<0.05）. Compared with blank group and vector group， the expression levels of CTDP1 and Bcl-2 proteins， proliferation activity， and number of clone formation of the SGC-7901 cells in CTDP1 over-expression group were increased （P<0.05）， while the apoptotic rate， the expression levels of Cyt C and Bax proteins were decreased （P<0.05）. Compared with blank group and miR-431-3p group， the expression levels of CTDP1 and Bcl-2 proteins， proliferation activity，and number of clone formation of the SGC-7901 cells in co-transfection group were increased （P<0.05）， while the apoptotic rate， expression levels of Cyt C and Bax proteins were decreased （P<0.05）. Conclusion Over-expression of miR-431-3p can inhibit the proliferation and promot the apoptosis of the human gastric cancer cells， and its mechanism may be related to targeted down-regulation of the CTDP1 gene expression. Objective To discuss the effect of miR-431-3p on the proliferation and apoptosis of the gastric cancer cells，and to elucidate its possible molecular mechanism.

Key words: Stomach neoplasm, MiR-431-3p, Carboxyl terminal domain phosphatase 1, Cell proliferation, Apoptosis

中图分类号:

R735.2

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