CXC趋化因子配体10对肝细胞癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的影响及其机制

doi:10.13481/j.1671-587X.20230516

吉林大学学报(医学版) ›› 2023, Vol. 49 ›› Issue (5): 1227-1233.doi: 10.13481/j.1671-587X.20230516

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CXC趋化因子配体10对肝细胞癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的影响及其机制

邓文俊^1,²,胡连涛^1,²,赵彬男^2,³,董新宇^1,²,李学斌⁴,李杰^1,²,杨馨妍^1,²,郭晓莉^1,²,李玥^1,²,曲义坤⁵(),王伟群^1,²()

^1.佳木斯大学基础医学院生理学教研室，黑龙江佳木斯 154007
^2.黑龙江省微生物-免疫调节网络与相关疾病重点实验室，黑龙江佳木斯 154007
^3.佳木斯大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，黑龙江佳木斯 154007
^4.佳木斯大学附属第一医院检验科，黑龙江佳木斯 154007
^5.佳木斯大学附属第一医院普外科，黑龙江佳木斯 154007

收稿日期:2022-11-07 出版日期:2023-09-28 发布日期:2023-10-26
通讯作者: 曲义坤,王伟群 E-mail:quyikun2008@163.com;wangweiqun1974@jmsu.edu.cn
作者简介:邓文俊（1997－），江西省南昌市人，在读硕士研究生，主要从事miRNA和趋化因子靶向关系方面的研究。
基金资助:
黑龙江省科技厅自然科学基金联合引导项目(LH2021H109)

Effect of CXC chemokine ligand 10 on proliferation and migration of hepatocellular carcinoma SMMC-7721 cells and its mechanism

Wenjun DENG^1,²,Liantao HU^1,²,Binnan ZHAO^2,³,Xinyu DONG^1,²,Xuebin LI⁴,Jie LI^1,²,Xinyan YANG^1,²,Xiaoli GUO^1,²,Yue LI^1,²,Yikun QU⁵(),Weiqun WANG^1,²()

^1.Department of Physiology，School of Basic Medical Sciences，Jiamusi University，Jiamusi 154007，China
^2.Microbial-Immunomodulatory Network and Related Diseases Key Laboratory，Heilongjiang Province，Jiamusi 154007，China
^3.Department of Biochemistry and Molecular Biology，School of Basic Medical Sciences，Jiamusi University，Jiamusi 154007，China
^4.Department of Laboratory，First Affiliated Hospital，Jiamusi University，Jiamusi 154007，China
^5.Department of General Surgery，First Affiliated Hospital，Jiamusi University，Jiamusi 154007，China

Received:2022-11-07 Online:2023-09-28 Published:2023-10-26
Contact: Yikun QU,Weiqun WANG E-mail:quyikun2008@163.com;wangweiqun1974@jmsu.edu.cn

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨外源性CXC趋化因子配体10（CXCL10）对肝细胞癌（HCC）SMMC-7721细胞增殖和迁移的影响，并阐明其作用机制。方法按照CXCL10作用浓度，将人HCC SMMC-7721细胞分为0 mg· L^－1CXCL10组、10 mg·L^－1CXCL10组和30 mg·L^－1CXCL10组。上述部分细胞给予细胞外调节蛋白激酶（ERK）抑制剂PD98059（80 μmol· L^－1）后，将SMMC-7721细胞分为0 mg·L^－1 CXCL10+PD98059组、10 mg·L^－1CXCL10+PD98059组和30 mg·L^－1CXCL10+PD98059组。CCK-8法检测各组SMMC-7721细胞增殖率，EdU法检测各组SMMC-7721细胞中EdU阳性表达率，Transwell小室实验检测各组SMMC-7721细胞迁移率，Western blotting法检测各组SMMC-7721细胞中ERK、磷酸化ERK（p-ERK）和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）蛋白表达水平。结果 CCK-8法检测，培养24 h后，与0 mg·L^－1 CXCL10组比较，10 mg·L^－1 CXCL10和30 mg·L^－1 CXCL10组SMMC-7721细胞增殖率升高（P<0.05或P<0.01）。EdU法检测，与0 mg·L^－1CXCL10组比较，10 mg·L^－1 CXCL10和30 mg·L^－1 CXCL10组SMMC-7721细胞中EdU阳性表达率升高（P<0.01）；Transwell小室实验检测，培养48 h后，与0 mg·L^－1CXCL10组比较，10 mg·L^－1 CXCL10和30 mg·L^－1 CXCL10组SMMC-7721细胞迁移率升高（P<0.01）。Western blotting法检测，细胞培养24 h后，采用CXCL10溶液处理24 h，与0 mg·L^－1CXCL10组比较，10 mg· L^－1CXCL10组和30 mg·L^－1 CXCL10组SMMC-7721细胞中ERK、p-ERK及Cyclin D1蛋白表达水平升高（P<0.01）。CCK-8法检测，加入ERK抑制剂PD98059后，与0 mg·L^－1 CXCL10组比较，10 mg·L^－1CXCL10＋PD98059组和30 mg·L^－1CXCL10＋PD98059组SMMC-7721细胞增殖率降低（P<0.05）；与10 mg·L^－1 CXCL10组比较，10 mg·L^－1 CXCL10＋PD98059组SMMC-7721细胞增殖率降低（P<0.05）；与30 mg·L^－1CXCL10组比较，30 mg·L^－1CXCL10＋PD98059组SMMC-7721细胞增殖率降低（P<0.05）。结论 CXCL10能够促进HCC SMMC-7721细胞增殖和迁移，其作用机制与上调ERK/p-ERK/Cyclin D1通路蛋白表达有关。

关键词: CXC趋化因子配体10, 肝细胞肿瘤, 细胞外调节蛋白激酶, 周期蛋白D1, 细胞增殖

Abstract:

Objective To discuss the effect of exogenous CXC chemokine ligand 10（CXCL10） on the proliferation and migration of the hepatocellular carcinoma（HCC）SMMC-7721 cells， and to clarify its mechanism. Methods The human HCC SMMC-7721 cells were divided into 0 mg·L^－1CXCL10 group，10 mg·L^－1CXCL10 group，and 30 mg·L^－1 CXCL10 group according to the CXCL10 concentration. Some of the above cells were treated with extracellular regulated protein kinase（ERK） inhibitor PD98059 （80 μmol·L^－1）， then the SMMC-7721 cells were divided into 0 mg·L^－1CXCL10+PD98059 group， 10 mg·L^－1CXCL10+PD98059 group， and 30 mg·L^－1 CXCL10+PD98059 group. The proliferation rates of the SMMC-7721 cells in various groups were detected by CCK-8 method； the EdU positive expression rates in SMMC-7721 cells in various groups were detected by EdU method； the migration rates of the SMMC-7721 cells in various groups were detected by Transwell chamber assay； the expression levels of ERK， phosphorylated ERK（p-ERK）， and Cyclin D1 proteins in the SMMC-7721 cells in various groups were detected by Western blotting method. Results The CCK-8 results showed that after cultured for 24 h， compared with 0 mg·L^－1 CXCL10 group， the proliferation rates of the cells in 10 mg·L^－1 CXCL10 group and 30 mg·L^－1CXCL10 group were increased （P<0.05 or P<0.01）；the EdU detection results showed that compared with 0 mg·L^－1CXCL10 group， the positive expression rates of EdU in the cells in 10 mg·L^－1CXCL10 group and 30 mg·L^－1CXCL10 group were increased （P<0.01）. The Transwell chamber assay results showed that after cultured for 48 h， compared with 0 mg·L^－1CXCL10 group， the migration rates of the cells in 10 mg·L^－1CXCL10 group and 30 mg·L^－1CXCL10 group were increased （P<0.01）.The Western blotting results showed that after cultured for 24 h and treated with CXCL10 for 24 h，compared with 0 mg·L^－1CXCL10 group， the expression levels of ERK， p-ERK，and Cyclin D1 proteins in the SMMC-7721 cells in 10 mg·L^－1 CXCL10 group and 30 mg·L^－1 CXCL10 group were increased （P<0.05）. The CCK-8 method results showed that after treated with ERK inhibitor PD98059， compared with 0 mg·L^－1 CXCL10 group， the proliferation rates of the SMMC-7721 cells in 10 mg·L^－1 CXCL10+PD98059 group and 30 mg·L^－1 CXCL10+PD98059 group were decreased （P<0.05）； compared with 10 mg·L^－1 CXCL10 group， the proliferation rate of the SMMC-7721 cells in 10 mg·L^－1 CXCL10+PD98059 group was decreased （P<0.05）； compared with 30 mg·L^－1 CXCL10 group， the proliferation rate of the SMMC-7721 cells in 30 mg·L^－1 CXCL10+PD98059 group was decreased （P<0.05）. Conclusion CXCL10 can promote the proliferation and migration of the HCC SMMC-7721 cells， and its mechanism is mainly related to the up-regulation of the expressions of ERK/p-ERK/Cyclin D1 pathway proteins.

Key words: CXC motif chemokine ligand 10, Hepatocellular carcinoma, Extracellular signal related kinase, Cyclin D1, Cell proliferation

中图分类号:

R735.7

邓文俊,胡连涛,赵彬男,董新宇,李学斌,李杰,杨馨妍,郭晓莉,李玥,曲义坤,王伟群. CXC趋化因子配体10对肝细胞癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2023, 49(5): 1227-1233.

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图/表 6

图1

图2

图3

图4

表1

表2

参考文献 20

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Group	ERK	p-ERK	Cyclin D1
0 mg·L^-1 CXCL10	0.79±0.02	0.90±0.03	0.64±0.04
10 mg·L^-1 CXCL10	1.05±0.03^*	1.10±0.02^*	1.06±0.03^*
30 mg·L^-1 CXCL10	1.21±0.02^*△	1.26±0.02^*△	1.18±0.02^*△

Group	Proliferation rate
0 mg·L^-1 CXCL10	100.00±0.00
10 mg·L^-1 CXCL10	112.45±3.21
30 mg·L^-1 CXCL10	125.62±4.38
0 mg·L^-1 CXCL10+PD98059	99.61±1.12
10 mg·L^-1 CXCL10+PD98059	97.68±2.24^*△
30 mg·L^-1 CXCL10+PD98059	96.39±3.37^*#

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Effect of CXC chemokine ligand 10 on proliferation and migration of hepatocellular carcinoma SMMC-7721 cells and its mechanism

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