Smad2/3/4真核表达质粒的构建及重组蛋白表达

J4 ›› 2012, Vol. 38 ›› Issue (2): 202-206.

Smad2/3/4真核表达质粒的构建及重组蛋白表达

张红艳¹|王春玉¹|姚远²|李彦姝1|王迪¹|李丰¹

1.中国医科大学细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室 辽宁沈阳 110001;2.辽宁省人民医院消化内科|辽宁沈阳 110016）

收稿日期:2011-12-01 出版日期:2012-03-28 发布日期:2012-03-28
通讯作者: 李丰 E-mail:（Tel:024-23256666-5347,E-mail:fli@mail.cmu.edu.cn）
作者简介:张红艳（1981-）|女|内蒙古自治区通辽市人|实验师|医学硕士|主要从事肿瘤信号转导通路的研究。
基金资助:
国家自然科学基金资助课题(31171360，30900752，30800415);教育部博士点基金资助课题(20102104110016)

Construction of |recombinant plasmid pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4　 and its protein expression

ZHANG Hong-yan¹,WANG Chun-yu¹,YAO Yuan²,LI Yan-shu¹,WANG Di¹,LI Feng¹

(1.Department of Cell Biology,Key Laboratory of Cell Biology,Ministry of Public Health,Key Laboratory of Cell Biology,Ministry of Education,China Medical University,Shenyang 110001,China；2. Department of Gastroenterology|People’s Hospital of Liaoning Province,Shenyang 110016,China)

Received:2011-12-01 Online:2012-03-28 Published:2012-03-28

摘要/Abstract

摘要：

目的:构建pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4真核表达质粒，证实融合蛋白在细胞内表达。方法:以pcDNA3.1-Smad2/3和pGEX2T-Smad4质粒为模板，设计特异性引物，PCR扩增Smad2/3/4全长编码基因，亚克隆至含有pcDNA3.1myc-HisA 标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚胎肾细胞HEK293 中，提取细胞蛋白进行 Western blotting 检测。结果：Smad2/3/4 全长基因序列克隆到真核表达载体pcDNA3.1myc-HisA中，酶切鉴定片段为1 401、1 275和1 656 bp。Western blotting检测到融合蛋白pcDNA3.1myc-HisA- Smad2/3/4的表达。结论:成功构建pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4真核表达质粒，同时鉴定其融合蛋白的表达。

关键词: Smad；蛋白免疫印记；融合蛋白

Abstract:

To construct the expression plasmid of pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4 and identify its fusion protein expression.Methods pcDNA3.1- Smad2/3 and pGEX2T-Smad4 were used as templates,and the special primers were designed.The Smad2/3/4 coding sequence was amplified by polymerase chain reaction (PCR) method and subcloned into pcDNA3.1myc-HisA vector. After the target region was sequenced,the plasmid was transfected into HEK293 cell line. The expression of the recombinant plasmid in HEK293 cells was detected by Western blotting.Results Smad2/3/4 was constructed into expression vector pcDNA3.1myc-HisA successfully.The lengthes of the fragments were 1 401,1 275 and 1 656 bp,and they were identified by restriction enzymes digestion.The expression of pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4 fusion protein was proved by Western blotting.Conclusion The eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4 is successfully constructed,and the expression of pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4 fusion protein is identified.

Key words: Smad;Western blotting;fusion protein

中图分类号:

张红艳|王春玉|姚远|李彦姝|王迪|李丰. Smad2/3/4真核表达质粒的构建及重组蛋白表达[J]. J4, 2012, 38(2): 202-206.

ZHANG Hong-yan,WANG Chun-yu,YAO Yuan,LI Yan-shu,WANG Di,LI Feng. Construction of |recombinant plasmid pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4　 and its protein expression[J]. J4, 2012, 38(2): 202-206.

[1]	周颖,高孟飞,朱慧勇. 间充质干细胞干性维持信号通路的研究进展[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 638-642.
[2]	李红，陈永浩，龚红君. 右美托咪定对肾癌根治术患者围术期炎性细胞因子和肾功能的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 588-591.
[3]	李海波，刘行，孙美花,梁建民. 孕期至幼年期低水平铅暴露仔鼠海马锌离子平衡的变化及其发育期海马神经元的损伤[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 521-528.
[4]	谢波，沈梅，叶文鑫，舒彦，梁臻，张心男. 依帕司他联合行为疗法治疗女性糖尿病膀胱的临床疗效评价[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 597-600.
[5]	李辉,赵丽晶,杜宇,杨铁铮，李国峰,陈亮,支晨阳,李娜,周建华. 结肠安栓联合舒血宁对溃疡性结肠炎大鼠的治疗作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 488-493.
[6]	张洪长，王恩鹏，陈新，唐燕，王洪鑫，王炫策，许新. 人参皂苷Re对UVC辐射损伤细胞的保护作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 507-511.
[7]	武国东，王素侠，及志勇，张舒岩. 急性心力衰竭大鼠B型钠尿肽水平与肝功能的关系[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 517-520.
[8]	陈宣男，全首祯. NDM1基因常规PCR与荧光定量PCR检测方法的建立及其检测结果比较[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 625-629.
[9]	周超熙,于滨,赵斌,马志强,赵文河,于跃明. 直肠癌环周切缘病理学检测判断中低位直肠癌患者预后的临床价值[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 601-604.
[10]	周广宇，韩雪梅，金玲. 神经精神狼疮患者影像学表现与自身抗体水平和预后的关系[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 609-614.
[11]	周建英，田勇韩青,贺庆,程凯亮,李幼琼. 影像学三维重建技术在寰椎立体模型建立及性别鉴定中的应用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 605-608.
[12]	沈煜，沈惠良，方秀统. 老年股骨颈骨折患者关节置换术后死亡危险因素分析[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 574-577.
[13]	王宗谦，卢新星. 终末期肾病患者抑郁程度与生存质量各个维度之间的关系[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 615-619.
[14]	李树春，王槐. 影响美托洛尔治疗效果的药物基因组学研究进展[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(2): 423-426.
[15]	胡源，贾卉，姜瑞，李京，刘涛涛. 不同验光方法对中年患者屈光状态的检测及其临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(2): 363-366.