吉林大学学报(医学版) ›› 2022, Vol. 48 ›› Issue (5): 1238-1246.doi: 10.13481/j.1671-587X.20220518
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摘要:
目的 采用慢病毒过表达胃癌细胞中Toll样受体4(TLR4)基因,探讨其对胃癌细胞自噬的作用,并阐明其作用机制。 方法 处于对数生长期的胃癌BGC-823细胞和SGC-7901细胞分为未感染组、阴性对照病毒组和基因过表达组,分别给予无慢病毒感染、空载体慢病毒和过表达TLR4慢病毒稳定感染。采用Western blotting法检测正常胃黏膜上皮GES-1细胞及胃癌BGC-823细胞、SGC-7901细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法分别检测各组细胞中TLR4、Beclin1和微管相关蛋白轻链3(LC3)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、磷酸化PI3K/磷酸化Akt(p-PI3K/p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和磷酸化mTOR(p-mTOR)信号通路相关蛋白及细胞自噬相关蛋白(LC3、Beclin1和p62)蛋白表达水平。 结果 BGC-823细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平高于胃黏膜上皮GES-1细胞。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞增殖活性明显升高(P<0.05或P<0.01)。与阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4 mRNA表达水平明显升高(P<0.01),BGC-823细胞中Beclin1 mRNA表达水平降低(P<0.05),SGC-7901细胞中LC3和Beclin1 mRNA表达水平降低(P<0.05)。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中LC3和Beclin1蛋白表达水平明显降低(P<0.05),p62、p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。 结论 过表达TLR4基因可以通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路明显抑制胃癌细胞的自噬活性。
中图分类号: