吉林大学学报(医学版) ›› 2023, Vol. 49 ›› Issue (4): 947-957.doi: 10.13481/j.1671-587X.20230416
艾克热木江·阿尔肯null,日夏提·帕尔哈提null,张峥,翟生()
AIKEREMUJIANG·Aerken, RIXIATI·Paerhati,Zheng ZHANG,Sheng ZHAI()
摘要:
目的 探讨微小RNA-7(miR-7)对激素性股骨头缺血坏死(SANFH)体外细胞模型的影响,并阐明其作用机制。 方法 将慢病毒miR-7模拟物(miR-7 mimic)和miR阴性对照(miR NC)转染至成骨细胞系MC3T3-E1中,同时设对照组,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组MC3T3-E1细胞中miR-7转染情况。MC3T3-E1细胞分为对照组、SANFH组、miR-7 mimic组和miR-7 mimic+衣霉素(TM)组,甲基强的松龙刺激细胞模拟SANFH离体状态,并以TM激活内质网应激反应。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,TUNEL染色法检测各组细胞TUNEL阳性率,碱性磷酸酶(ALP)染色法观察各组细胞ALP染色情况,比色法检测各组细胞中ALP水平,茜素红S染色观察各组细胞矿化结节形成情况, RT-qPCR法和Western blotting法检测各组细胞中Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙蛋白(OCN)和骨桥蛋白(OPN)mRNA及蛋白表达水平,Western blotting法检测各组细胞中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-12、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平,免疫荧光双标记染色法检测各组细胞中GRP78和Caspase-3蛋白表达荧光强度。 结果 与对照组和miR NC组比较,miR-7 mimic组细胞中miR-7表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,SANFH组细胞增殖活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率和TUNEL阳性率明显升高(P<0.05),ALP染色细胞较少且ALP活性明显降低(P<0.05),细胞中矿化结节形成减少,细胞中Runx2、OCN和OPN mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞中GRP78、CHOP、Caspase-12、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),细胞中GRP78和Caspase-3蛋白表达荧光强度明显升高(P<0.05);与SANFH组比较,miR-7 mimic组细胞增殖活性明显升高(P<0.05),细胞凋亡率和TUNEL阳性率明显降低(P<0.05),ALP染色细胞增加且ALP活性明显升高(P<0.05),细胞中矿化结节形成明显增加,细胞中Runx2、OCN和OPN mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05),GRP78、CHOP、Caspase-12、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞中GRP78和Caspase-3蛋白表达荧光强度明显降低(P<0.05);与miR-7 mimic组比较,miR-7 mimic+ TM组细胞增殖活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率和TUNEL阳性率明显升高(P<0.05),ALP染色细胞较少且ALP活性明显降低(P<0.05),细胞中矿化结节形成减少,细胞中Runx2、OCN和OPN mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞中GRP78、CHOP、Caspase-12、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),细胞中GRP78和Caspase-3蛋白表达荧光强度明显升高(P<0.05)。 结论 miR-7能够促进SANFH状态下MC3T3-E1细胞的成骨分化作用,该机制可能与抑制内质网应激介导的凋亡途径有关。
中图分类号: