吉林大学学报(医学版) ›› 2023, Vol. 49 ›› Issue (3): 590-598.doi: 10.13481/j.1671-587X.20230306
田宏远1,尹彩云,王丽1,胡沛芸,张晨阳,李秋月,郑清照1,齐亚莉2,方芳1(),王志成1()
Hongyuan TIAN1,Caiyun YIN,Li WANG1,Peiyun HU,Chenyang ZHANG,Qiuyue LI,Qingzhao ZHENG1,Yali QI2,Fang FANG1(),Zhicheng WANG1()
摘要:
目的 探讨羟基脲(HU)联合辐射对沉默α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色体相关蛋白(ATRX)后A549细胞周期和凋亡的影响,并阐明其可能的分子机制。 方法 建立稳定沉默ATRX的A549细胞模型(shATRX-A549),荧光显微镜下观察细胞感染情况,采用Western blotting法检测沉默ATRX细胞中ATRX蛋白表达量验证细胞模型,以shNC-A549细胞作为阴性对照。实验分为对照组、HU组、辐射组(给予8 Gy X射线辐射)和HU+辐射组(给予HU+8 Gy X射线辐射)。流式细胞术检测各组不同细胞周期细胞百分率和细胞凋亡率,采用RNA测序(RNA-seq)检测沉默ATRX后各组细胞中mRNA表达,采用Western blotting法检测各组细胞中细胞分裂周期因子(CDC25B)、细胞周期蛋白(Cyclin) B1和细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)蛋白表达量。 结果 荧光显微下可见shNC-A549和shATRX-A549细胞表达绿色荧光蛋白(GFP);Western blotting法检测,与shNC-A549细胞比较,shATRX-A549细胞中ATRX蛋白表达量明显减少。流式细胞术检测,与对照组比较,HU组shNC-A549细胞中G0/G1期细胞百分率升高(P<0.05),S期和G2/M期细胞百分率明显降低(P<0.05或P<0.01);辐射组shNC-A549细胞中G0/G1期和S期细胞百分率明显降低(P<0.01),G2/M期细胞百分率明显升高(P<0.01);HU+辐射组shNC-A549细胞中G0/G1期细胞百分率明显降低(P<0.01),S期和G2/M期细胞百分率明显升高(P<0.01);与对照组比较,HU组shATRX-A549细胞中G0/G1期细胞百分率升高(P<0.05),G2/M期细胞百分率明显降低(P<0.01);辐射组shATRX-A549细胞中G2/M期细胞百分率明显升高(P<0.01),G0/G1期和S期细胞百分率明显降低(P<0.01);HU+辐射组shATRX-A549细胞中G0/G1期细胞百分率明显降低(P<0.01),S期和G2/M期细胞百分率明显升高(P<0.01);与shNC-A549细胞比较,辐射组shATRX-A549细胞中G0/G1期细胞百分率升高(P<0.05),G2/M期细胞百分率降低(P<0.05);HU+辐射组shNC-A549细胞中S期细胞百分率升高(P<0.05)。与对照组比较,HU组、辐射组和HU+辐射组shNC-A549细胞和shATRX-A549细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01)。与shNC-A549细胞比较,HU组和HU+辐射组shATRX-A549细胞凋亡率升高(P<0.05)。沉默ATRX后mRNA差异表达涉及c-Myc、Esp1、Cdc20、Plk1、CycA/B、Cip1和PCNA。Western blotting法检测,与对照组比较,HU组、辐射组和HU+辐射组shNC-A549和shATRX-A549细胞中CDC25B、Cyclin B1和CDK1蛋白表达量减少;与shNC-A549细胞比较,对照组和HU组shATRX-A549细胞中Cyclin B1蛋白表达量略有减少,辐射组和HU+辐射组细胞中CDC25B、Cyclin B和CDK1蛋白表达量均增加。 结论 HU和辐射均可导致沉默ATRX的A549细胞周期阻滞和细胞凋亡,其机制与CDC25B/Cyclin B/CDK1通路有关。
中图分类号: