弓形虫GRA1基因的克隆与原核表达

J4 ›› 2011, Vol. 37 ›› Issue (4): 631-635.

弓形虫GRA1基因的克隆与原核表达

孙玲¹,刘慧颖^1|2,李淑红¹|宫鹏涛³|张西臣³|宁静^*

1.吉林大学白求恩医学院病原生物学教研室|吉林长春 130021；2.吉林省长春市绿园区疾病预防控制中心|
吉林长春 130062；3.吉林大学畜牧兽医学院预防兽医学系|吉林长春 130062

收稿日期:2010-12-10 出版日期:2011-07-28 发布日期:2011-07-28
通讯作者: 李淑红(Tel:0431-85619574,E-mail:lish@jlu.edu.cn) E-mail:lish@jlu.edu.cn
作者简介:孙玲（1987-）|女|内蒙古自治区赤峰市人|在读医学硕士|主要从事病原微生物的研究。
基金资助:
国家科技支撑计划资助课题（2008BAD96B11-3）；吉林省发改委基金资助课题（200603）

Cloning and prokaryotic expression of GRA1 gene of Toxoplasma gondii

SUN Ling¹,LIU Hui-ying^1,2,LI Shu-hong¹,GONG Peng-tao³,ZHANG Xi-chen³,NING Jing*

1.Department of Pathogenobiology,Norman Bethune College of Medicine,Jilin University,Changchun
130021,China;2.Department of Luyuan Center for Disease Control and Prevention,Jilin Province,
Changchun 130062,China;3.Department of Animal Preventive Veterinary Medicine,School of Animal
Science and Veterinary Medicine,Jilin University,Changchun 130062,China

Received:2010-12-10 Online:2011-07-28 Published:2011-07-28

摘要/Abstract

摘要：

目的:克隆并构建 PET-28a-GRA1 重组表达载体，转化入大肠杆菌 E. coli BL21，诱导表达并鉴定，为进一步研究 GRA1 的生物学特性和免疫保护作用奠定实验基础。方法：根据 GenBank 中编码 GRA1 的已知基因序列设计并合成一对引物，应用 PCR 技术扩增 GRA1 基因，插入原核表达载体 PET-28a 中，构建重组表达质粒 PET-28a-GRA1，转化 E. coli BL21,IPTG 诱导后，进行 SDS-PAGE 和 Western blotting 鉴定。结果：克隆的 GRA1
基因与 GenBank 收录的基因序列同源性为100%。对重组质粒进行酶切和 PCR 鉴定，获得573 bp 大小的目的基因片段，与预期结果相符，成功地构建了重组质粒 PET-28a-GRA1。SDS-PAGE 电泳分析表明重组蛋白条带的相对分子质量约为24 000，Western blotting 显示重组蛋白能被鼠抗弓形虫血清识别。结论：成功获取 GRA1 基因，构建了 PET-28a-GRA1 重组质粒并获得了高效表达。

关键词: 刚地弓形虫；GRA1；克隆；基因表达

Abstract:

Abstract:Objective To clone the GRA1 gene and construct the prokaryotic expression vector PET-28a-GRA1,and to transform the expression vector into E.coli BL21,then induce and identiy,and to lay a foundation for the study on the biological characteristics and immune protection of GRA1.Methods A pair of primers were designed according to the sequence of GRA1 from GenBank.The GRA1 gene was amplified by PCR.The amplified GRA1 gene was inserted into prokaryotic expression vector PET-28a,and the constructed recombinant plasmid PET-28a-GRA1 was transformed to E.coli BL21 for expression under induction of IPTG.The expressed product was identified by SDS-PAGE and Western blotting.Results:The sequencing result showed the homology of 100% of the cloned GRA1 gene to that reported in GenBank.The positive recombinant plasmids PET-28a-GRA1 were identified by restriction endonuclease digestion and PCR,the objective gene fragment with the size of 573 bp was acquired,in accordance with the expected results,and the recombinant plasmid PET-28a-GRA1 was constructed successfully.The results of SDS-PAGE revealed that the molecular weight of recombinant protein PET-28a-GRA1 was 24 000 and Western blotting proved that the recombinant protein was recognized by murine antisera against Toxoplasma gondii.Conclusion The GRA1 gene has been successfully cloned,the recombinant
plasmid PET-28a-GRA1 is generated and expressed highly in prokaryote.

Key words: Toxoplasma gondii；GRA1；cloning；gene expression

中图分类号:

孙玲,刘慧颖,李淑红|宫鹏涛|张西臣. 弓形虫GRA1基因的克隆与原核表达[J]. J4, 2011, 37(4): 631-635.

SUN Ling,LIU Hui-ying,LI Shu-hong,GONG Peng-tao,ZHANG Xi-chen,NING Jing. Cloning and prokaryotic expression of GRA1 gene of Toxoplasma gondii[J]. J4, 2011, 37(4): 631-635.

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