miR-125a-5p在结核分枝杆菌潜伏感染患者外周血单个核细胞中的表达及其意义

doi:10.13481/j.1671-587X.20250622

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨微小RNA（miR）-125a-5p在感染结核分枝杆菌（MTB）患者外周血单个核细胞（PMBCs）中表达的差异及其对巨噬细胞CD80和CD206蛋白表达的影响，并阐明其临床意义。方法选择2022年7月—2023年6月就诊、经临床确诊的活动性结核病（ATB）感染者40例（ATB组），结核分枝杆菌潜伏感染（LTBI）患者35例（LTBI组）和健康体检者40名（对照组），禁食12 h后次日清晨分别采集3组研究对象空腹血样本，分离血清，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组研究对象血清中炎症因子水平，同时提取各组PBMCs，采用流式细胞术检测各组研究对象PBMCs中CD80和CD206蛋白表达水平，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组研究对象PBMCs中miR-125a-5p和白细胞介素6（IL-6）mRNA表达水平。结果 3组研究对象年龄一般资料比较差异均无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较，ATB组和LTBI组患者血清中血沉（ESR）、单核细胞（MONO）百分比、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素10（IL-10）水平均明显升高（P<0.05），淋巴细胞（LY）百分比明显降低（P<0.05）；与ATB组比较，LTBI组患者血清中ESR和IL-10水平均明显降低（P<0.05），LY百分比明显升高（P<0.05）；白细胞（WBC）计数组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。流式细胞术检测，与对照组比较，ATB组和LTBI组患者PBMCs中CD80和CD206蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；与ATB组比较，LTBI组患者PBMCs中CD206蛋白表达水平明显升高（P<0.05），CD80蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。RT-qPCR法检测，与对照组比较，ATB组和LTBI组患者PBMCs中miR-125a-5p和IL-6 mRNA表达水平均明显升高（P<0.05）；与ATB组比较，LTBI组患者PBMCs中miR-125a-5p和IL-6 mRNA表达水平均明显升高（P<0.05）。相关性分析，miR-125a-5p表达水平与TNF-α水平和IL-6 mRNA表达水平呈正相关关系（r=0.406，P<0.05；r=0.351，P<0.05），与IL-10水平呈负相关关系（r=－0.368，P<0.05）。miR-125a-5p表达水平诊断LTBI患者的受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）值为0.89（P<0.01），灵敏度为0.85，特异度为0.88。结论 miR-125a-5p在LTBI组患者PBMCs中表达水平明显升高，其可影响巨噬细胞向M1极化，促进巨噬细胞炎症反应过程，参与肺结核的发生发展。

关键词: 肺结核, 结核分枝杆菌潜伏感染, 微小RNA-125a-5p, 巨噬细胞, 炎症反应

Abstract:

Objective To discuss the differential expression of microRNA（miR）-125a-5p in peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） of the patients with mycobacterium tuberculosis （MTB） infection and its effect on macrophage polarization， and to clarify its clinical significance. Methods A total of 40 patients with active tuberculosis （ATB）（ATB group）， 35 patients with latent tuberculosis infection （LTBI）（LTBI group）， and 40 healthy physical examinees （control group） clinically diagnosed from July 2022 to June 2023 were selected. The fasting blood samples of the subjects in three groups were collected next morning after 12 h of fasting， and then serum was separated. Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA） method was used to detect the levels of inflammatory factors in the serum of the subjects in various groups. Simultaneously， the PBMCs were extracted from the subjects in various groups； flow cytometry was used to detect the expression levels of CD80 and CD206 proteins in the PBMCs of the subjects in various groups； real-time fluorescence quantitative PCR （RT-qPCR） method was used to detect the expression levels of microRNA （miR）-125a-5p and interleukin-6 （IL-6） mRNA in PBMCs of the subjects in various groups. Results There were no statistically significant differences in the general information of the subjects among three groups （P>0.05）. Compared with control group， the erythrocyte sedimentation rate （ESR）， percentages of monocytes （MONO）， tumor necrosis factor-α （TNF-α） levels， and interleukin-10 （IL-10） levels in serum of the patients in ATB group and LTBI group were significantly increased （P<0.05）， and the percentages of lymphocytes （LY） were significantly decreased （P<0.05）； compared with ATB group， the ESR and level of IL-10 in serum of the patients in LTBI group were significantly decreased （P<0.05）， and the percentage of LY was significantly increased （P<0.05）； there were statistically significant differences in the counts of white blood cell （WBC） of the subjects among various groups （P>0.05）. The flow cytometry results showed that compared with control group， the expression levels of CD80 and CD206 proteins in PBMCs of the patients in ATB group and LTBI group were significantly increased （P<0.05）. Compared with ATB group， the expression level of CD206 protein in the PBMCs of the patients in LTBI group was significantly increased （P<0.05）， and the expression level of CD80 protein was significantly decreased （P<0.05）. The RT-qPCR results showed that compared with control group， the expression levels of miR-125a-5p and IL-6 mRNA in the PBMCs of the patients in ATB group and LTBI group were significantly increased （P<0.05）； compared with ATB group， the expression levels of miR-125a-5p and IL-6 mRNA in PBMCs of the patients in LTBI group were significantly increased （P<0.05）. The correlation analysis results showed that the miR-125a-5p expression level was positively correlated with the TNF-α level and IL-6 mRNA expression level （r=0.406， P<0.05； r=0.351， P<0.05）， and negatively correlated with the IL-10 level （r=-0.368， P<0.05）. The area under the receiver operating characteristic （ROC） curve （AUC） value of miR-125a-5p expression level for diagnosing LTBI patients was 0.89 （P<0.01）， with a sensitivity of 0.85 and a specificity of 0.88. Conclusion The expression level of miR-125a-5p in PBMCs of the patients in LTBI group is significantly increased， and it can affect the macrophage polarization to M1， promote the inflammatory response process of macrophages and participate in the occurrence and development of pulmonary tuberculosis.

Key words: Pulmonary tuberculosis, Latent tuberculosis infection, MicroRNA-125a-5p, Macrophage, Inflammatory response

中图分类号:

R378.91

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图/表 7

表1

表2

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表3

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Group	n	Gender [n (η/%)]		Age （x±s）
Group	n	Male	Female	Age （x±s）
Control	40	17(42.50)	23(57.50)	46.25±11.74
ATB	40	21(52.50)	19(47.50)	39.50±12.39
LTBI	35	18(51.40)	17(48.60)	43.23±12.70
χ²/F		0.943		3.041
P		0.624		0.052

Group	n	ESR（mm·h^-1）	WBC（×10⁹ L^-1）	Percentages of MONO （η/%）	Percentages of LY （η/%）	TNF-α[ρ_B/(μg·L^-1）]	IL-10[ρ_B/(μg·L^-1）]
Control	40	5.63±3.13	6.13±1.47	6.31±1.92	28.58±6.13	11.87 (10.71,15.62)	53.02 (47.34,60.26)
ATB	40	23.40±15.51^*	6.69±2.16	7.92±2.14^*	17.35±6.10^*	18.20 (15.50,26.33)^*	100.39 (61.10,123.05)^*
LTBI	35	17.23±10.93^*△	6.66±2.50	7.37±2.03^*	22.18±6.81^*△	21.31 (18.49,32.55)^*	78.19 (65.99,87.73)^*△
H/F		26.31	0.93	6.46	31.61	54.72	31.81
P		<0.01	0.40	0.02	<0.01	<0.01	<0.01

Group	miR-125a-5p	IL-6 mRNA
Control	1.00	1.00
ATB	5.04(3.93,7.23)^*	3.19(2.97,3.82)^*
LTBI	13.36(10.96,18.26)^*△	7.89(7.03,8.96)^*△
H	101.86	103.71
P	<0.01	<0.01