吉林大学学报(医学版) ›› 2023, Vol. 49 ›› Issue (1): 122-130.doi: 10.13481/j.1671-587X.20230116
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Junyi JIN,Mu LI,Yaoyuan HU,Yihui WANG()
摘要:
目的 探究miR-150-5p与非SMC凝聚体Ⅰ复合物亚基G(NCAPG)的靶向关系及其对肝细胞肝癌(HCC)细胞生物学功能的影响,为HCC的临床诊断和治疗提供潜在靶点。 方法 通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与NCAPG的靶向关系。将HCC Huh7细胞根据转染质粒不同分为模拟物阴性对照(mimic NC)组、miR-150-5p模拟物(miR-150-5p mimic)组、miR-150-5p模拟物+过表达阴性对照(miR-150-5p mimic+ovNC)组和miR-150-5p模拟物+过表达NCAPG(miR-150-5p mimic+ovNCAPG)组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中NCAPG mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中NCAPG蛋白表达水平,5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测各组细胞EdU阳性率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell实验检测各组细胞中迁移和侵袭细胞数。将裸鼠分为agomiR-NC组、agomiR-150-5p组、agomiR-150-5p+过表达阴性对照(agomiR-150-5p+ovNC)组和agomiR-150-5p+过表达NCAPG(agomiR-150-5p+ovNCAPG)组,Huh7细胞皮下成瘤,检测各组裸鼠肿瘤体积和质量。 结果 双荧光素酶报告基因实验证实NCAPG是miR-150-5p的靶基因。与mimic NC组比较,miR-150-5p mimic组Huh7细胞中NCAPG mRNA和蛋白表达水平及EdU阳性率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.05);与miR-150-5p mimic+ovNC组比较,miR-150-5p mimic+ovNCAPG组Huh7细胞中NCAPG mRNA和蛋白表达水平及EdU阳性率明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.05)。与agomiR-NC比较,agomiR-150-5p组裸鼠Huh7细胞移植瘤体积和质量明显减少(P<0.05);与agomiR-150-5p+ovNC组比较,agomiR-150-5p+ovNCAPG组裸鼠Huh7细胞移植瘤体积和质量明显增加(P<0.05)。 结论 miR-150-5p通过靶向结合抑制NCAPG表达进而抑制HCC细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长,促进细胞凋亡。
中图分类号: