目的：研究20(S)-原人参二醇（Protopanaxadiol,PPD）对环磷酰胺(CTX)化疗人小细胞肺癌荷瘤裸鼠的增效、减毒作用及其机制。方法：建立A549人小细胞肺癌裸鼠体内移植肿瘤模型，随机分为：对照组、PPD组、CTX小剂量组、CTX大剂量组、CTX小剂量+PPD组和CTX大剂量+PPD组，于移植肿瘤模型成功建立后次日起分别腹腔注射0.5%羧甲基纤维素钠、PPD（50 mg•kg^-1•d^-1）、 CTX（10 mg•kg^-1•d^-1）、CTX（20 mg•kg^-1•d^-1）、CTX（10 mg•kg^-1•d^-1）+PPD（50 mg•kg^-1•d^-1）和CTX（20 mg•kg^-1•d^-1）+PPD（50 mg•kg^-1•d^-1），连续15 d给药后检测小鼠体重、肿瘤重量及体积、外周血白细胞数量、骨髓有核细胞计数、脾脏及胸腺指数、T淋巴细胞转化率、NK细胞杀伤活性，采用流式细胞术检测细胞凋亡情况，同时检测caspase-3活性。结果：与单独化疗药物组比较，PPD（50 mg•kg^-1）与化疗药联合组抑瘤率升高（P<0.01），骨髓有核细胞数增加（P<0.01），脾脏及胸腺指数均增高（P<0.01），T淋巴细胞增殖能力和NK细胞杀伤活性均增强（P<0.05）。与单独化疗药物组比较，联合用药组肿瘤细胞凋亡率及caspase-3活性均明显提高（P<0.05或P<0.01），单独使用PPD组caspase-3活性增加不显著。结论：PPD对CTX化疗人小细胞肺癌荷瘤裸鼠有明显的增效、减毒作用，其机制可能与提高机体免疫力、活化caspase-3诱导肿瘤细胞凋亡有关。

目的：构建PIAS3 （活化型STAT3抑制蛋白）的Myc融合蛋白真核表达重组质粒，并表达融合蛋白Myc-PIAS3。方法： 采用PCR方法，扩增鼠PIAS3基因全长cDNA编码区序列。将该1 851 bp的特异性片段连接到T载体上，将其亚克隆至pCMV-Myc真核表达载体的SalⅠ和NotⅠ位点之间。将pCMV-Myc-PIAS3重组质粒转染前列腺癌PC3细胞，利用Myc抗体通过Western blotting法检测融合蛋白Myc-PIAS3的表达。结果：重组pCMV-Myc-PIAS3质粒通过酶切和测序鉴定了其正确性。EcoRⅠ酶切鉴定时有4 357和1 318 bp 2条带，XbaⅠ酶切鉴定时有3 291 bp和2 384 bp 2条带，与预期结果一致。测序结果显示，13个氨基酸Myc在N端，然后是阅读框架正确的PIAS3的基因序列。pCMV-Myc-PIAS3重组质粒转染PC3细胞，利用Myc抗体通过Western blotting法检测融合蛋白Myc-PIAS3的表达，在相对分子质量68 000处检测到特异的蛋白表达条带。结论：成功构建pCMV-Myc-PIAS3重组质粒，并表达融合蛋白Myc-PIAS3。

目的：探讨姜黄素(Cur)对中波紫外线（UVB）照射后人类角质形成细胞(HaCaT)氧化致癌的预防作用及其机制。方法：细胞经UVB照射后，立即加入浓度分别为1.25、2.50和5.00 mg•L^-1的Cur继续培养，用酶化学法测定氧化和抗氧化物含量；由罗丹明123和Fluo-3/AM荧光强度计算细胞Δψ和［Ca²⁺］i，用流式细胞术检测凋亡相关因子蛋白表达。结果：与对照组比较，UVB照射组HaCaT细胞Δψ、SOD和GSH-Px含量及Bcl-2蛋白表达均显著下降（P<0.01），而细胞［Ca²⁺］i、ROS、NO和MDA含量以及caspase-3、cytochrom c和Bax蛋白表达均明显升高（P<0.01）；与UVB照射组比较，UVB照射后加入Cur各组细胞Δψ和Bcl-2蛋白表达以及2.50和5.00 mg•L^-1组的SOD和GSH-Px含量均明显升高（P<0.01），而各加药组的ROS、NO和MDA含量以及caspase-3、cytochrom c和Bax蛋白表达和2.50和5.00 mg•L^-1组的［Ca²⁺］i均显著降低（P<0.01），Bcl-2/Bax比值为0.58~2.50，并显示Cur剂量-效应关系。结论：Cur可能通过提高线粒体膜电位和抗氧化酶活性，降低［Ca²⁺］i、氧化物含量及凋亡相关诱导因子蛋白表达，从而达到其抗UVB辐射细胞致癌的预防作用。

目的：观察白桦脂醇对大鼠酒精性肝损伤的保护作用及其机制。方法：将SD大鼠随机分为6组，正常组和酒精性肝病（ALD）模型组、白桦脂醇低、中、高剂量组和阳性药物（益肝灵片）对照组。采用白酒灌胃的方法建立大鼠酒精性肝病模型后，白桦脂醇各剂量组(10、20 和40 mg•kg^-1•d^-1)灌胃15 d， 阳性药物对照组给予益肝灵片(含水 飞蓟宾100 mg•kg^-1•d^-1)灌胃15 d后，禁食12 h处死大鼠，检测各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT)、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰基转移酶（GGT）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（CHO)、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL)以及血清、肝匀浆中甘油三酯（TG)水平，同时做肝脏的病理切片观察。结果：与正常对照组比较，ALD模型组的大鼠血清ALT、AST、ALP、GGT活性和TG、CHO、LDL含量均明显升高(P<0.01)/DL的含量明显降低(P<0.01)；血清、肝组织匀浆TG含量明显升高；肝组织病理损伤严重，肝小叶结构紊乱，肝细胞索消失，细胞肿胀，呈气球样变，胞质内可见大小不一、数量不等的脂滴。中、高剂量白桦脂醇能明显地降低ALD大鼠血清中ALT、AST、ALP、GGT活性和TG、CHO含量，且显著降低血清、肝组织中TG含量，与ALD模型组比较差异均具有显著性（P<0.01）;高剂量白桦脂醇还能明显地改善由酒精引起的肝组织脂肪样变和坏死，与阳性药物对照组结果类似。结论：高剂量白桦脂醇对酒精性肝损伤有明显的保护作用，其作用机制可能为抗氧化、清除自由基代谢产物,抑制脂质过氧化反应；调节血脂、减少脂肪在肝脏的沉积。

目的：研究下丘脑Hypocretin神经肽在缰核(Hb)对睡眠-觉醒调节中的作用，为探讨Hb在睡眠-觉醒调节中的作用提供理论依据。方法：成年雄性Wistar大鼠20只，随机分为实验组(n=10)和对照组（n=10），实验组灌胃给予催眠药唑吡坦5 mg•kg^-1，对照组给予等量生理盐水，待唑吡坦药效达峰值时，将大鼠断头处死，取出Hb组织，提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Hb中HcrtR2 mRNA的表达水平。另取大鼠(n=5)单侧Hb微量注射霍乱毒素b亚单位(CTb），采用CTb逆行追踪法观察下丘脑内是否有免疫阳性神经元存在。结果：经RT-PCR检测，实验组和对照组Hb中HcrtR2 mRNA的表达水平（相对平均灰度值分别为0.13±0.03和0.26±0.04）比较差异有显著性（P<0.05）。免疫组织化学染色显示，在大鼠下丘脑外侧区(LHA)、外侧视前区（LPO）和弓状核（ARC）都可见CTb标记免疫阳性神经元。结论：下丘脑Hypocretin神经肽及其受体参与Hb对睡眠-觉醒调节的作用，且Hb接受下丘脑内睡眠相关结构LHA、LPO、ARC的纤维投射。

目的:建立大鼠颌下腺细胞体外培养的方法，为涎腺细胞的体外扩增及基因治疗涎腺疾病奠定基础。方法:无菌条件下取1日龄Wistar大鼠颌下腺,经LB3、胰酶联合消化后原代细胞接种于含2%胎牛血清、表皮生长因子、胰岛素等的DMEM/F12培养液，相差显微镜观察原代及传代细胞的形态特征，免疫组织化学染色鉴定细胞来源，PAS染色观察体外培养第2代细胞合成、分泌多糖功能。结果:体外培养的大鼠颌下腺原代细胞为圆形、三角形、多边形。细胞传至第2代生长良好,形态未发生改变。体外培养的第2代细胞角蛋白、E-钙联蛋白免疫组织化学染色、PAS染色均为阳性,表明细胞为上皮来源且具有合成、分泌多糖类物质的功能。结论:酶联合消化法成功地分离、体外培养了大鼠颌下腺细胞，第2代细胞仍可保持腺细胞的生物学特征。

目的：观察降脂酮对四氯化碳（CCl₄）诱导的慢性肝损伤的保护作用及其作用机制。方法：建立CCl₄慢性肝损伤动物模型，大鼠72只随机分为6组（每组12只），分别设为空白对照组以及CCl₄慢性肝损伤模型组（简称模型组）、阳性药对照组及降脂酮低、中和高剂量组（50、100和200 mg•kg^-1•d^-1）。测定大鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）。肝组织中过氧化氢酶（CAT）活性及各胱甘肽（GSH）含量。结果：与模型组比较，降脂酮低、中和高剂量组血清ALT、AST活性均明显降低（P<0.05或P<0.01），肝组织CAT活性及GSH含量显著升高（P<0.05或P<0.01）；与阳性药对照组比较，降脂酮高剂量组ALT活性明显降低（P<0.01），低、中剂量组ALT活性与阳性对照组比较差异均无显著性（P>0.05）；3个剂量组中，降脂酮高剂量组ALT活性低于低、中剂量组（P<0.05），低、中剂量之间比较差异无显著性（P>0.05），中、高剂量组AST活性较低剂量组均明显降低（P<0.05）。结论：降脂酮对CCl₄所致大鼠慢性肝损伤具有保护作用，其机制可能与抗氧化的作用有关。

目的：对比研究水浴和微波加热条件下附子中乌头类生物碱的水解规律，检测与不同中药配伍煎煮后附子中乌头类生物碱的含量变化。方法：分别以水煎煮和微波加热的方法提取附子药材，采用高效液相色谱法(HPLC)分别对其中的3种双酯型生物碱及其水解产物进行含量测定；同时检测与不同中药配伍煎煮后，附子中乌头类生物碱减少程度的差异。结果：附子水煎煮30 min后，中乌头碱和次乌头碱的含量分别变为峰值的10.5%和41.9%，乌头碱完全检测不到；附子微波加热150 s后中乌头碱、乌头碱和次乌头碱含量分别为峰值的59.2%、41.4%和86.6%。与生附子单煎煮比较，生附子与大黄、干姜或甘草共煎后，乌头类生物碱总含量均明显下降，分别降至附子单煎煮时的52.8%、66.2%和53.4%；与人参或白芍共煎煮后略有下降，分别为附子单煎煮时的79.5%和83.7%。结论:附子中乌头类生物碱在水煎煮和微波加热过程中有不同的水解规律；生附子与大黄、干姜、甘草、人参或白芍共煎后乌头类生物碱含量均有下降。

目的：探讨分离、培养新生大鼠脊髓源性神经干细胞的方法并对其进行分化鉴定，为临床应用脊髓神经干细胞进行周围神经系统疾病的替代治疗奠定细胞学基础。方法：首次采用注射器灌注法分离新生24 h Wistar大鼠脊髓源性神经干细胞，神经细胞培养液调节细胞终浓度并进行培养，形成克隆后，传代。将传至第1代培养细胞加入含10%胎牛血清的DMEM /F12 培养基诱导其分化。形态学方法观察细胞的生长状态，利用鼠抗Nestin抗体、鼠抗GFAP抗体、鼠抗MAP-2抗体进行分化的神经干细胞免疫组织化学鉴定。 结果：新生大鼠脊髓源性神经干细胞可在体外培养条件下贴壁生长，在血清的作用下可分化为具有典型神经细胞形态、表达特异性组织蛋白Nestin、GFAP、MAP-2的神经细胞。结论： 大鼠脊髓内可分离出脊髓源性神经干细胞，呈贴壁增殖状态，并有分化能力。

目的:探讨核因子κB（NF-κB）在高浓度葡萄糖诱导胰岛细胞凋亡中的作用。方法：对分离纯化的小鼠胰腺胰岛细胞进行体外培养，按DMEM培养液里葡萄糖浓度不同，分为6组：G1组（5.6 mmol•L^-1葡萄糖）、G2组（7.8 mmol•L^-1）、G3组（11.1 mmol•L^-1）、G4组（16.7 mmol•L^-1）、 G5组(22.2 mmol•L^-1)及G6组（27.6 mmol•L^-1）。采用放射免疫法检测各组胰岛细胞胰岛素分泌水平；免疫组织化学染色法检测NF-κB活性；免疫荧光法检测细胞色素C释放和细胞核染色检测细胞凋亡。结果：当葡萄糖浓度5.6～11.1 mmol•L^-1时，随着葡萄糖浓度升高，胰岛细胞胰岛素分泌逐渐增加（P<0.05)，NF-κB的活性逐渐增加（P<0.05)，但此时细胞凋亡未见显著的变化（P>0.05)，细胞色素C释放的组间比较差异无显著性（P>0.05)。当葡萄糖浓度≥16.7 mmol•L^-1时，与葡萄糖浓度≤11.1mmol•L^-1各组比较， NF-κB表达明显增加，细胞色素C的释放也逐渐增强（P<0.05)，胰岛细胞凋亡百分率同时也呈明显增加趋势（P<0.05）。结论：高浓度葡萄糖可以诱导胰岛细胞NF-κB表达增加，细胞色素C释放增强，同时诱导胰岛细胞凋亡，提示NF-κB的激活与胰岛细胞凋亡可能存在必然的联系，抑制NF-κB活性可能对于保护胰岛细胞有重要作用。

目的：探讨体内性激素的改变对局灶性脑缺血脑皮质肾素-血管紧张素（RAS）相关基因表达的影响。方法：建立雄激素致不孕大鼠（ASR）模型，给予果纳芬（rhFSH）后应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。大鼠随机分为ASR+假手术（sham）组、ASR+rhFSH+sham组、ASR+MCAO组及ASR+rhFSH +MCAO组，每组12只。2，3，5 - 氯化三苯基四氮唑（TTC）法检测大脑的缺血面积；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测脑皮质血管紧张素原（AGT）、血管紧张素转换酶（ACE）、血管紧张素受体1（AT1）和血管紧张素受体2（AT2）的mRNA表达。 结果：TTC染色显示，ASR+MCAO组及ASR+rhFSH+MCAO组大鼠大脑均可见苍白色的缺血区域。ASR+MCAO组及ASR+rhFSH+MCAO组脑梗死面积均明显大于ASR+sham组及ASR+rhFSH+sham组（P<0.05），但ASR+rhFSH+MCAO组脑组织梗死面积明显小于ASR+MCAO组(P<0.05)。与ASR+sham组比较，ASR+rhFSH+sham组的AGT、ACE、AT1及AT2 mRNA表达均无明显改变（P>0.05）；而ASR+MCAO组大脑皮质缺血侧ACE、AT1及AT2 mRNA的表达均明显增高(P<0.05)，但AGT未见明显改变。与ASR+rhFSH+sham组比较，ASR+rhFSH+MCAO组缺血侧大脑皮质AGT、ACE、AT1及AT2 mRNA的表达均无明显改变（P>0.05）。结论：雄激素的增高通过激活RAS系统参与了缺血性神经细胞的损伤，而rhFSH通过下调RAS系统减轻脑缺血损伤。

目的：检测纳米SiO₂粒子的特性及其在无细胞体系中的氧化能力，为医用纳米SiO₂粒子体内外毒性的预测提供依据。方法：用透射电镜观测2种纳米SiO₂粒子粒径、分散性、形状；用Zeta电位粒度分析仪检测纳米粒子在不同介质（纯水、生理盐水、10% Tween 80溶液、RPMI 1640培养液、含1%胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液，超声30 s）溶液及不同时间（0、24、48和72 h）的粒径分布及团聚状态；用ＤDCFH-DA法Ｆ检测粒子在无细胞体系中自发产生自由基的能力。结果：电镜结果显示,2种纳米SiO₂粒子均呈球形，大小一致，分布均匀、分散性好，粒子平均粒径分别为（43.0±4.2）和（68.0±5.7）nm；在纯水、生理盐水、10% Tween 80溶液、RPMI 1640培养液及含1%胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液中，Si-43 nm及Si-68 nm 粒子粒径变化很大，其中在生理盐水中的粒径最接近电镜结果，为74.0和96.7 nm。超声30 s后0、24、48和72 h时，Si-43 nm及Si-68 nm粒子粒径在生理盐水中不发生团聚；在含1%胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液中发生团聚，形成相似大小的团聚体；在30~100 μg的质量范围内，2种粒子自发产生自由基的能力相似但很弱，相当于2.5 μmol•L^-1左右H₂O₂当量。结论：一定粒径的纳米SiO₂在细胞培养液中形成大粒径团聚体，粒子自身只有较弱的自发产生自由基的能力。

目的：评价成人上位、中位胸椎节段（T1～T8）椎弓根形态对螺钉植入安全性的影响。方法：采用大体直接测量方法，测量5具新鲜成人尸体胸椎（T1～T8）椎弓根的横径，比较其与临床应用的胸椎椎弓根螺钉的匹配程度；模拟手术情况，按照个体化原则选择植入螺钉型号，并于直视下植入椎弓根螺钉，肉眼下观察螺钉植入后椎弓根皮质破坏情况。结果：成人胸椎T6～T8节段，椎弓根横径分别为4.53（4.40～4.70）、5.38（5.25～5.60）和5.55（5.50～5.80）mm，均>4.5　mm，可以满足最小直径螺钉植入。T1～T5椎弓根横径分别为4.74（3.85～5.25）、4.47（3.45～5.25）、4.15（3.60～4.65）、3.75（3.10～4.50）和4.25（3.70～4.65）mm。在所有测量胸椎标本中，椎弓根横径<4.5 mm的椎体占标本总体的22.5％。螺钉植入椎弓根后，2个椎体发生椎弓根外侧皮质破坏。结论：成人T3～T4节段椎弓根横径最窄，影响椎弓根螺钉的安全植入，但在上位及中位胸椎的大部分节段，可以安全植入。

目的：探讨过氧化氢（H₂O₂）诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡以及钙调神经磷酸酶（CaN）抑制剂他罗利姆（FK506）对细胞的保护作用，为心肌缺血/再灌注所致的心肌损伤及拮抗机制提供实验依据。方法：将大鼠H9c2心肌细胞株体外培养进行实验，实验分为正常对照组（n=6）和H₂O₂各处理组（n=6）。正常对照组采用生理盐水，实验各组分别用50、100、200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理1、 6和24 h后，用罗丹明（Rhodamme-123）荧光探针检测心肌细胞线粒体膜电位(Δψmt)变化，用Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡率；并采用100 μmol•L^-1 H₂O₂处理6 h建立大鼠心肌细胞凋亡的损伤模型，给予高、低剂量FK506（0.60和0.15 μmol•L^-1）干预，流式细胞术检测心肌细胞凋亡率。结果：①100、200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理组1 h 时线粒体膜电位均较对照组显著升高（P<0.01）， 6和24 h时，200和400 μmol•L^-1组Δψmt值均低于100 μmol•L^-1 组（P<0.05），且400 μmol•L^-1组低于200 μmol•L^-1组（P<0.05）；②200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理组1　h 时心肌细胞凋亡率和坏死率均较对照组显著增加（P<0.05），24　h达高峰。③ 高、低剂量FK506干预组与单纯100 μmol•L^-1H₂O₂处理组比较，心肌细胞凋亡率均明显降低（P<0.01），高、低剂量组比较差异无显著性（P>0.05）。结论：H₂O₂可损伤心肌细胞线粒体，引起线粒体膜电位下降，导致细胞凋亡。CaN抑制剂对H₂O₂诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡具有保护作用。

目的：探讨氯喹对体外培养人肝癌细胞HepG2增殖和细胞周期的影响，为氯喹作为肝癌治疗药物的研究提供依据。方法： 对数生长期人肝癌HepG2细胞分为对照组、氯喹 (8.00、16.00、32.00、64.00和128.00 mmol•L^-1 )处理组，用MTT法检测不同培养时间（24、48和72 h）细胞增殖活性，用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率。结果：与对照组比较,32.00~128.00 mmol•L^-1氯喹处理HepG2细胞24 h和8.00~128.00　 mmol•L^-1氯喹处理HepG2细胞48 h~72 h，细胞增殖活性随着剂量和时间增加而逐渐下降( P< 0.01)，以72 h、128.00 mmol•L^-1氯喹抑制作用最强( P< 0.01)；与对照组比较，氯喹处理组（32.00~128.00 mmol•L^-1）G₂/M期细胞比率及细胞凋亡率随着剂量增加而上升( P< 0.01)，以128.00 mmol•L^-1组最为明显。结论：氯喹具有抑制人肝癌HepG2细胞增殖作用，可诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡，并可使人肝癌HepG2细胞周期阻滞在G₂/M期而抑制细胞活性，可能作为肝细胞癌的治疗药物。

目的：构建黑色素浓集激素受体2（MCHR2）/增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合蛋白真核表达载体pEGFPN1-MCHR2，转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y，建立稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系MCHR2-SH-SY5Y。方法：采用聚合酶链反应(PCR)法从人胎脑cDNA文库扩增MCHR2全长cDNA片段。用基因重组方法将其克隆到质粒pEGFPN1，构建真核表达载体pEGFPN1-MCHR2，并用Lipofectamine^TM转染到SH-SY5Y细胞，通过G418筛选，建立稳定表达MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞系，采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting检测MCHR2的表达并用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白亚细胞定位。结果：扩增出人MCHR2全长cDNA;成功构建真核表达载体pEGFPN1-MCHR2；RT-PCR、Western blotting检测到MCHR2-SH-SY5Y细胞MCHR2的表达，激光共聚焦显微镜观察转染pEGFPN1-MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞融合蛋白定位于细胞膜，而转染空质粒pEGFPN1的SH-SY5Y细胞EGFP定位于细胞质。结论：成功建立稳定表达人MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞株。

目的：观察骨髓间充质干细胞（MSCs）在电离辐射诱发的胸腺组织损伤中的迁徙、定居及修复作用。方法： 体外分离培养的C57BL/6小鼠MSCs，DAPI标记，经C57BL/6小鼠（n=6）尾静脉注入后，分别于1、5及10 d处死小鼠（每次2只），取胸腺组织在激光共聚焦显微镜下观察MSCs在小鼠胸腺组织中富集情况；另取18只C57BL/6小鼠行1.75 Gy X线全身照射，每周1次，连续4周，制备电离辐射诱发的胸腺组织损伤动物模型。实验设正常对照组、照射组、照射+生理盐水组及照射+MSCs组，每组6只。3个月后取各组胸腺组织，采用流式细胞术测定胸腺细胞凋亡率，组织学观察MSCs对胸腺组织损伤的修复作用。结果：　激光共聚焦显微镜下观察 MSCs经尾静脉注入1 d后即出现在胸腺组织内，5 d后开始弥散，10 d后广泛弥散。流式细胞术检测到照射组胸腺细胞凋亡率明显高于正常对照组（P<0.05），照射+MSCs组胸腺细胞凋亡率明显低于照射组（P<0.05）。病理观察结果，正常对照组小鼠胸腺组织皮、髓质结构清楚，皮质内有大量的淋巴细胞，髓质内存在少量淋巴细胞；照射组和照射+生理盐水组胸腺组织皮、髓质结构不清，淋巴细胞广泛凝固性坏死；照射+MSCs组胸腺组 织皮、髓质内可见残存或新生的淋巴组织，皮质结构仍存在。结论：MSCs可以迅速地富集在损伤胸腺组织中，促进损伤胸腺再生与修复。

目的：观察维生素K3（Vk3）对Hela细胞雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其底物p70S6激酶(p70S6K)α1、α2、β1、β2和细胞周期素D1（cyclin D1）mRNA表达的变化及N-乙酰半胱氨酸 (NAC)对mTOR及其底物的影响，探讨mTOR信号转导蛋白在人宫颈癌的发生、发展过程中的作用。方法：实验分为对照组(Con)、Vk3处理组（Vk3）、Vk3与NAC联合作用（Vk3+NAC）组及NAC单独应用组(NAC)，MTT法检测各组Hela细胞存活率，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组Hela细胞中mTOR、p70S6K-α1、p70S6K-α2、p70S6K-β1、 p70S6K-β2及cyclin D1 mRNA表达。结果：与Con组比较，Vk3组Hela细胞存活率显著降低（P<0.01），mTOR、p70S6K-α1、p70S6K-α2、p70S6K-β1、p70S6K-β2及cyclin D1 mRNA表达量均明显下降（P<0.05）；而与Vk3组比较，Vk3+NAC组Hela细胞存活率显著增加（P<0.01），上述指标mRNA表达量均明显增加（P<0.05）。结论：Vk3通过其氧化应激作用抑制Hela细胞的增殖，其机制与降低mTOR信号转导蛋白及cyclin D1的基因表达有关。

目的：探讨结肠癌细胞总RNA电穿孔法转染成熟树突状细胞（mDCs）的转染效率及对树突状细胞(DCs）特征和功能的影响,为DCs核酸肿瘤疫苗的制备及其在临床应用奠定基础。方法： 用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素4（rhIL-4）将人外周血单核细胞(PBMC)诱导成未成熟树突状细胞（imDCs），肿瘤细胞坏死因子-α（TNF-α）作用24 h刺激其成熟。实验设为imDCs组和mDCs组。Trizol法提取特异表达癌胚抗原(CEA)的结肠癌细胞SW480总RNA，电穿孔法将总RNA转染mDCs，设为RNA转染DCs组。流式细胞术检测各组细胞表面分子标志变化和转染DCs组的CEA蛋白表达情况。ELISA法检测各组细胞IL-12分泌水平。结果：rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α能将PBMC诱导成具有典型毛刺样突起形态学特征的DCs。imDCs组DCs表面CD1a表达呈阳性，CD80弱阳性，CD83阴性。mDCs组DCs表面CD1a、CD83、CD80表达均呈阳性。RNA转染DCs组DCs表面CD1a、CD83、CD80表达均呈阳性。总RNA转染mDCs后4 h检测到CEA蛋白表达。mDCs组、RNA转染DCs组IL-12分泌量与imDCs组比较均显著升高（P＜0.01)， 而mDCs组与RNA转染DCs组比较差异无显著性（P>0.05)。结论：结肠癌细胞总RNA可通过电穿孔法转染mDCs并表达CEA蛋白，电穿孔不改变mDCs的表面分子特征及功能。

目的：探讨北五味子总木脂素（SCL）对高脂血症大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制，为SCL将来用于治疗高脂血症并发心肌缺血等疾病提供理论依据和实验基础。方法：建立大鼠高脂血症模型，分为对照组、假手术组、模型组及SCL 60、20和5 mg•kg^-1组以及200 mg•kg^-1复方丹参片组（CDT）。再灌注后，测定心肌梗死面积、血脂及心肌髓过氧化物酶（MPO）含量，观察心肌病理变化。结果：与模型组比较SCL 60、20和5 mg•kg^-1组随着剂量增加心肌梗死面积与左心室面积比值及MPO活性降低（P<0.01）；SCL 60及20 mg•kg^-1组缺血区心肌纤维断裂及坏死减少，灶性出血及炎性细胞浸润减轻；SCL 60和20 mg•kg^-1组血清 TC、TG、LDL-c 及 ApoB降低（P<0.05 或 P<0.01），HDL-c及ApoA1升高（P<0.05 或 P<0.01）。结论：SCL对高脂血症大鼠心肌缺血再灌注损伤有一定的保护作用，其机制可能与抑制中性粒细胞浸润、影响血脂代谢有关。

目的：研究卵巢浆液性囊腺癌组织中prostasin基因的表达，探讨prostasin基因在卵巢浆液性囊腺癌发生和发展中的意义。方法：应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测10例卵巢浆液性囊腺癌、10例卵巢浆液性囊腺瘤及10例正常卵巢组织中prostasin mRNA的表达量。应用免疫组织化学方法检测prostasin蛋白在60例卵巢浆液性囊腺癌、24例卵巢浆液性囊腺瘤及24例正常卵巢组织中的表达率。结果：prostasin mRNA在卵巢浆液性囊腺癌组织中表达量显著增高（0.415±0.177），与正常卵巢组（0.192±0.128）及卵巢浆液性囊腺瘤组（0.237±0.232）比较,差异均有显著性（P<0.05)。prostasin蛋白主要在细胞质中表达，在卵巢浆液性囊腺癌组的阳性表达率(65.0%)明显高于正常卵巢组(12.5%)及卵巢浆液 性囊腺瘤组(25.0%)（P<0.01)；卵巢浆液性囊腺癌病理分级越高、临床分期越晚组织中prostasin蛋白表达率越高（P<0.05)。结论： prostasin 基因在卵巢癌发生和发展中起促进作用。

目的：探讨转化生长因子β1（TGF-β1）对巨噬细胞清道夫受体A（ScR-A） 和B（ScR-B,CD36）的影响，为阐明动脉粥样硬化(AS)的形成(尤其形成早期)提供依据并为防治AS提供理论支持。 方法： 人类单核细胞株（THP-1）源性巨噬细胞分成对照组和实验组。实验组加3.0 mg•L^-1抗 TGF-β1 抗体 (Anti TGF-β1 Ab)，对照组加用3.0 mg•L^-1　IgG，利用巨噬细胞摄取和Northern blotting法，同步检测对乙酰化和氧化低密度脂蛋白（LDL）摄取（结合、摄入和分解）以及ScR-A 和CD36 mRNA表达。结果：实验组¹²⁵I-Ac-LDL的结合、摄入和分解量分别为（48.67±6.52）、（412.30±12.21）及（896.48±32.74） μg•g^-1 protein，与对照组［(8.23±1.24）、（45.69±6.92）及（112.18±20.15) μg•g^-1 protein］比较，差异均具有显著性（P<0.01）；实验组¹²⁵I-Ox-LDL的结合、摄入和分解量分别为（102.32±3.11）、（412.94±15.21)和（788.94±31.16) μg•g^-1 protein，与对照组［(78.56±2.81)、（123.94±12.11)及（345.38±27.17) μg•g^-1 protein］比较，差异均具有显著性（P<0.01）。实验组ScR-A 和CD36 mRNA的表达均较对照组增强。 实验组与对照组ScR-A mRNA比值为1.7，CD36 mRNA比值为1.12。结论： TGF-β1通过抑制ScR-A和CD36表达干预AS的形成及其发展过程，这种作用主要是通过ScR-A实现的。

目的：探讨骨髓细胞肾上腺素β₂受体(β₂-AR)的表达及其意义，为神经因素调节骨髓造血理论提供依据。方法：用Ficoll淋巴细胞分离液从正常小鼠骨髓分离的单个核细胞直接涂片、粒-单集落造血祖细胞培养后涂片、骨髓基质细胞培养爬片，同时行骨髓石蜡切片及全骨髓细胞涂片，用免疫组织化学SP法检测上述标本中骨髓细胞β₂-AR的表达。另取小鼠采用淋巴细胞注射法制备免疫介导的再生障碍性贫血（简称再障）模型，β₂-AR拮抗剂组静脉注射ICI 118551，对照组静脉注射生理盐水，至第8天采用Western blotting 检测3组小鼠骨髓单个核细胞β₂-AR的表达。结果：正常小鼠骨髓细胞β₂-AR免疫组织化学反应可见胞质及胞膜呈深浅不等的棕黄色，其中单个核细胞48%强阳性，造血祖细胞55%中等阳性、45%弱阳性，骨髓基质细胞68%强阳性，其他辅助细胞呈不同程度的阳性反应。再障模型组、β₂-AR 拮抗剂组及对照组小鼠骨髓单个核细胞β₂-AR相对表达量分别为1.03±0.31、1.72±0.29及1.41±0.35。与对照组比较，再障模型组β₂-AR表达量明显降低（P<0.05），β₂-AR拮抗剂组β₂-AR表达明显增加（P<0.05）。结论：正常小鼠骨髓细胞有β₂-AR表达，其表达量与骨髓造血状态有关，提示β₂-AR可能通过神经-内分泌-免疫网络途径参与造血调节。

目的：探讨激活素A（Act A）及其结合蛋白follistatin(FS)在小鼠胰腺损伤过程中的表达，为胰腺损伤后组织修复与重建奠定基础。方法：雄性ICR小鼠21 只，随机分为对照组（n＝6）与实验组（n＝15）。应用一次性大剂量腹腔注射链脲菌素（STZ）制备小鼠胰岛损伤模型，免疫组织化学染色法检测Act A和 FS蛋白表达， 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Act A和FS mRNA相对转录水平。　结果：免疫组织化学染色显示，Act A主要分布在正常小鼠胰岛细胞，腺泡细胞也有表达；FS仅表达在小鼠胰岛细胞，在腺泡细胞不表达。RT-PCR检测结果显示，Act A和FS mRNA均在正常小鼠胰腺组织表达，与对照组比较，实验组小鼠Act mRNA表达随着诱导时间的延长表达量进行性减少（P<0.01），而FS mRNA在诱导的第7天表达明显增加，第14和21天下降（P<0.01）。结论：Act A及FS主要表达在小鼠胰岛组织，在STZ诱导胰腺损伤过程中Act-FS系统表达失平衡，可能与糖尿病的发生、发展有关。

目的：探讨c-myc和k-ras基因多态性与辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤的关系。方法：采用 ⁶⁰Co（剂量率0.382 Gy•min^-1，总剂量7 Gy）分别照射C57BL/6J和BALB/c小鼠建立小鼠胸腺淋巴瘤模型，6个月后处死小鼠，取胸腺组织，用Promega DNA纯化试剂盒提取胸腺淋巴瘤细胞基因组DNA，以聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法对c-myc基因rs51048361（C/T）、k-ras基因rs30221756（A/G）和rs30161609（T/C）单核苷酸多态性进行检测。结果：⁶⁰Co照射引起2种小鼠的胸腺瘤发生率不同，对应的 rs51048361位点基因型分别为C/C和T/T，rs30221756位点基因型分别为A/A和G/G，rs30161609位点基因型分别为T/T和C/C。结论：辐射敏感性不同的C57BL/6J和BALB/c 小鼠 ⁶⁰Co照射后rs51048361、rs30221756和rs30161609　位点基因型不同，推测c-myc和k-ras基因多态性与辐射诱发胸腺淋巴瘤有关联。

目的：研究低剂量照射(LDR)对人结肠癌细胞(HCT-8)增殖、细胞周期及其相关信号蛋白表达的影响，为低剂量辐射临床应用提供理论依据。方法：体外培养人结肠癌细胞HCT-8，分为7个实验组：假照组（0 mGy），25、50、75、100和200 mGy低剂量X线照射组和1 000 mGy高剂量X线照射组。照射后用细胞计数法及噻唑蓝比色(MTT)检测细胞增殖率，用流式细胞术测定细胞周期中G₀/G₁、S、G₂/M期的比例。应用蛋白法分析检测细胞周期及相关信号蛋白（共9个蛋白）的表达。结果：经细胞计数及MTT实验证实，25、50、75、100和200 mGy低剂量辐射组HCT-8细胞增殖率与假照组比较差异均无显著性（P>0.05），与高剂量组比较差异均有显著性（P<0.05）。经流式细胞术检测，与假照组比较，75 mGy低剂量辐射12和24 h后，HCT-8细胞 G₀/G₁期比例增高(P>0.05)，S期比例显著降低(P<0.05);G₂/M期比例显著升高（P<0.05）；48 h后G₀/G₁、S及G₂/M期HCT-8细胞比例与假照组比较差异均无显著性（P>0.05）。蛋白分析检测，低剂量辐射后HCT-8细胞中Akt、PCNA、P27、CDK2、cyclin E、EGFR、ERK1/2、p-ERK、p-GSK-3α/β等 9种蛋白表达量均较假照组降低。结论：低剂量辐射对HCT-8细胞增殖无促进作用，但在一定程度抑制细胞增殖及细胞周期相关蛋白的表达。

目的：构建调控β-半乳糖苷酶（β-gal）基因表达的四环素基因表达调控载体，验证其在肝癌细胞内调控β-半乳糖苷酶基因的表达，为进一步利用该调控系统调控治疗基因治疗肝癌奠定实验基础。方法：根据2个四环素调控子结合位点（TetO2）基因与pcDNA3.1载体的基因核苷酸序列，设计引物，以pcDNA3.1载体为模板进行PCR。将具有串联2个四环素调控子结合位点（TetO2）基因的PCR产物连接入pcDNA3.1载体CMV启动子下游，构建成pcDNA3.1-TetO2载体，应用ABI 3130 测序仪利用pcDNA3.1-TetO2载体对TetO2 PCR产物进行测序分析。再将β-gal克隆入pcDNA3.1-TetO2载体，构建成受四环素调控表达的β-半乳糖苷酶基因的表达载体pcDNA3.1-TetO2-β-gal。利用脂质体将携带四环素调控子基因（TR）的pcDNA6/TR载体转染到肝癌细胞HepG2中，利用杀稻瘟菌素进行细胞转染的稳定筛选，采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TR基因在HepG2细胞内的表达。将pcDNA3.1-TetO2-β-gal载体转染到稳定表达pcDNA6/TR的HepG2细胞中，转染3～4 d后，给予强力霉素（4 mg•L^-1），利用β半乳糖苷酶原位染色试剂盒染色，检测β-半乳糖苷酶基因的表达。结果：构建的pcDNA3.1-TetO2载体测序结果表明，串联2个四环素调控子结合位点（TetO2）基因片段插入到pcDNA3.1载体CMV启动子基因下游。pcDNA3.1-TetO2-β-gal载体酶切鉴定结果表明，β-gal成功地克隆入pcDNA3.1-TetO2载体。RT-PCR结果显示，TR基因在pcDNA6/TR转染的经杀稻瘟菌素筛选的HepG2细胞内得到稳定表达。给予强力霉素后，β-半乳糖苷酶基因在稳定转染TR 基因的HepG2 细胞 内得以表达；而未给予强力霉素，β-半乳糖苷酶基因在稳定转染TR 基因的HepG2 细胞内表达受到抑制。结论：成功地构建了调控β-半乳糖苷酶基因表达的四环素基因表达调控载体，利用该载体成功地调控了β-半乳糖苷酶基因在HepG2细胞内的表达。

目的: 探讨人白细胞介素12(IL-12)两个亚基基因通过连接肽基因进行拼接的新方法。为进一步研究IL-12基因的生物学功能以及应用提供实验基础。方法：采用两个牛弹性蛋白基序（10个氨基酸）的基因序列为两个亚基基因拼接的连接肽基因。根据人IL-12 p35、p40两个亚基基因片段以及连接肽基因核苷酸序列设计引物，其中p40基因下游引物包括部分连接肽基因序列以及Kpn Ⅰ 酶切位点，p35基因上游引物包括部分连接肽基因序列以及Kpn Ⅰ 酶切位点。通过聚合酶链反应(PCR)方法分别获得人IL-12 p35与p40基因片段。利用Kpn Ⅰ内切酶对p35与p40基因的PCR产物进行酶切，酶切产物回收后利用T4 DNA连接酶进行连接，应用p40基因上游引物与p35基因下游引物对连接产物进行PCR扩增。利用Kpn Ⅰ内切酶对连接产物进行酶切鉴定。将扩增的连接产物克隆入T载体，挑选阳性克隆并进行酶切鉴定，酶切鉴定正确的克隆进行拼接产物的核苷酸序列测序。结果：通过PCR分别获得约1 000 bp大小的p40基因片段与600 bp大小的p35基因片段，两个基因酶切片段连接后PCR扩增获得1 600 bp左右的拼接产物，采用Kpn I 内切酶对拼接产物进行酶切后获得约1 000和600 bp大小的基因片段，分别与p40和p35基因片段大小一致。拼接产物的T载体经酶切鉴定可见1 600 bp 大小的酶切产物，拼接产物测序结果与GenBank核酸数据库上的p40基因、p35基因以及连接肽基因核苷酸序列完全一致。结论：利用该基因分子拼接技术成功地将人白介素12两个亚基基因通过连接肽基因进行拼接。建立了一种简单、方便、有效进行人白细胞介素12两个亚基基因拼接的新方法，为进一步研究IL-12的生物学功能以及基因治疗提供实验基础。

目的：观察人参皂苷单体Rb₁、Re及Rg₁对肾上腺素所致小鼠耳微 循环障碍的影响。方法：昆明种小鼠40只分为4组（每组10只），对照组、人参皂苷单体Rb₁组、人参皂苷单体Re组及人参皂苷单体Rg₁组。除对照组外，各组按10 mg•kg^-1•d^-1腹腔注射给药一次，对照组腹腔注射同体积的生理盐水。连续给药4 d，末次给药30 min时将小鼠固定于微循环观测分析系统显微镜下，观测小鼠正常及腹腔注射盐酸肾上腺素(1 mg•kg^-1)10、20和30 min时小鼠耳廓微血管的管径、血流速度及毛细血管交叉网开放数目。结果：与对照组比较，人参皂苷单体Re组及Rg₁组小鼠在腹腔注射盐酸肾上腺素(10、20和30 min)小鼠耳廓微血管管径均明显扩张(P<0.05 或 P<0.01)，微血管血流速度均明显加快(P<0.05 或 P<0.01)，微血管交叉网开放数目均明显增加(P<0.05)；Re组与Rg₁组比较差异无显著性(P>0.05)。人参皂苷Rb₁组对肾上腺素所致微循环障碍无显著影响。结论：人参皂苷单体Re及Rg₁对肾上腺素所致小鼠微循环障碍具有明显的改善作用。

目的： 构建重组人HIF-lα 真核表达质粒，为进行人HIF-lα基因的克隆与表达做准备。 方法： 从人外周血细胞中提取总RNA，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法反转录合成cDNA。分别以含有绿色荧光蛋白(EGFP)片段的质粒PIREGFP质粒和反转录合成的cDNA 为模板，加入所设计的3对引物［EGFP-linker、HIF-1α)上游(up)和下游(down)引物］所扩增目的基因片段分别与T载体连接后转化大肠杆菌DH5α，LB/Amp平板培养基筛选菌落，提取质粒。测序正确后经酶切先后克隆进入pVAX1载体。 结果：通过聚合酶链反应(PCR)分别获得约870、1 199和672 bp的特异性DNA片段，分别与T载体连接后测序，测序结果与GenBank所提供的基因序列相同。将以上3个片段依次连入pVAX1载体后，所得质粒经酶切鉴定后获得约1 800 bp　片段，与预想结果一致。结论：成功构建了重组人HIF-1α真核表达质粒pVAX1-EGFP-linker-HIF-1α。

目的: 检测IL-12对肥大细胞介质分泌的影响并探讨其可能的信号转导通路。方法：小鼠肥大细胞P815培养后，用不同浓度IL-12激发后收集细胞和上清，上清用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测组胺、IL-6和IL-13的分泌量，P815细胞用细胞激发信号ELISA（CASE）方法检测信号转导通路蛋白ERK和P38磷酸化情况。 结果： 不同浓度IL-12(0、1.0、10.0 和100.0 μg•L^-1)激发后，P815细胞IL-13分泌量较基础分泌量均增加，并且随IL-12浓度增加而增加;而P815细胞IL-6和组胺释放量与基础分泌量比较差异均无显著性。ERK信号转导通路抑制剂PD98059、U0126预处理的经不同浓度IL-12激发P815细胞后，细胞内ERK磷酸化百分比较未加抑制剂组均显著降低（P<0.05）；且P815细胞IL-13分泌量较未加抑制剂组亦显著降低（P<0.05）。P38信号转导通路抑制剂SB203580预处理的不同浓度IL-12激发P815细胞后，细胞内P38磷酸化百分比与未加抑制剂组比较差异均无显著性；且P815细胞IL-13分泌量与未加抑制剂组比较差异均无显著性。结论：IL-12刺激肥大细胞P815分泌IL-13可能是通过激活ERK信号转导通路实现的。

目的：探讨SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离培养、表型鉴定和标记的方法，为进一步研究MSCs干预器官移植的免疫排斥奠定基础。方法：采用直接贴壁法分离培养MSCs；通过流式细胞术检测细胞表面标志抗原CD90、CD45的表达率对培养的 MSCs进行表型鉴定；DAPI标记第3代MSCs，观察标记效率。结果:体外培养的原代MSCs 48 h内可见有少量贴壁细胞，7～10 d达到90%汇合；流式细胞术检测，第3代MSCs表面标记物CD90、CD45的阳性率分别为99.8%、6.8%, 提示MSCs表达CD90而不表达CD45；用DAPI进行细胞标记后，荧光显微镜下见所有MSCs均已被标记蓝色荧光，提示DAPI标记法敏感性好，标记效率高。结论：贴壁培养法是一种简便易行的培养MSCs方法，操作简单，成功率高，可以作为培养SD大鼠MSCs的常规方法；DAPI标记可作为标记MSCs的一种有效手段。

目的：研究重组人骨形成蛋白2（rhBMP₂）对人牙髓干细胞分化及Delta蛋白表达的影响，为人牙髓干细胞的研究提供理论依据。方法：酶消化法获得人牙髓干细胞,光镜下进行形态学观察,免疫荧光法检测细胞表面标志的表达；取第5代牙髓干细胞, 分为实验组（加含50 μg•L^-1rhBMP₂的培养液）及阴性对照组（只加入培养液），检测碱性磷酸酶活性和Delta蛋白表达的变化。结果：人牙髓干细胞呈集落状生长, 免疫组织化学检测显示nestin、 vimentin染色呈阳性，免疫荧光法检测STRO-1呈阳性。与阴性对照组比较，实验组第7、14及21天碱性磷酸酶活性均明显升高（P<0.01）,第21天Western blotting法检测Delta蛋白表达明显升高(P<0.05)。 结论：培养的牙髓干细胞具有干细胞特性，并且rhBMP₂可使其碱性磷酸酶活性增高并上调Delta蛋白表达，提示Delta蛋白可能参与牙髓干细胞向成牙本质样细胞分化的过程。

目的：比较克氏针内固定和钢板内固定治疗复杂跟骨关节内骨折的效果，探索治疗复杂跟骨关节内骨折的最佳方法。方法：对34例35足Sanders Ⅲ和Ⅳ型跟骨闭合骨折患者(24例24足行克氏针内固定治疗、10例11足采用解剖钢板内固定治疗),随访12～60个月，采用Kerry评分系统判定足部功能优良率，评估并发症的发生率。结果： 克氏针内固定组24例24足，足部功能优良率41.7％（10/24）,近期并发症发生率41.7％(10/24),远期并发症发生率58.3％(14/24)。解剖钢板内固定组10例11足，足部功能优良率77.8％(9/11)，近期并发症发生率36.4％（4/11），远期并发症发生率22.2％(2/11)。解剖钢板内固定组的远期并发症发生率明显低于克氏针内固定组（P<0.05），解剖钢板内固定组的足部功能优良率明显高于克氏针内固定组（P<0.05）。结论：切开复位解剖钢板内固定能够明显地降低远期手术并发症的 发生率和提高术后足部的功能，对于SandersⅢ和Ⅳ型复杂跟骨关节内骨折的治疗，解剖钢板内固定的疗效好于克氏针内固定。

目的：研究缺氧诱导因子1（HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF）在动脉粥样硬化闭塞症(ASO)患者缺血下肢的表达及分布规律，为应用HIF-1α基因治疗缺血性疾病提供实验依据。方法：应用免疫组织化学SP法对15例ASO截肢患者肢体的血管、肌组织及3例正常人肌组织中的HIF-1α、VEGF蛋白进行检测；同时应用CD34标记血管，根据CD34阳性的血管内皮细胞数测定微血管密度（MVD）。结果：ASO患者缺血肢体主干血管及缺血肌组织内HIF-1α、VEGF表达灰度值较正常人均明显增加，MVD计数增加。增加最高的是胫后动脉（HIF-1α为932.5±545.2，VEGF为354.5±75.8，MVD为38.4±8.4），股浅动脉、胫前动脉、小腿缺血肌肌间动脉、小腿缺血肌以及足坏死肌中HIF-1α和VEGF表达量均明显低于胫后动脉；在缺血血管壁内，HIF-1α、VEGF表达量及MVD计数均随着缺血程度的加重而增加；而在缺血肌组织内，HIF-1α、VEGF表达量及MVD计数增加均与缺血程度无关联；HIF-1α、VEGF在缺血肌组织内的表达量均明显低于缺血大血管。结论：HIF-1α、VEGF在ASO患者缺血肢体主干血管和缺血肌组织中均有较高水平表达，但在缺血肌组织内的表达均明显低于缺血大血管。

目的：探讨死亡相关蛋白激酶（DAPK）基因的表达、甲基化状态及与口腔鳞状细胞癌（OSCC）的关系，为研究DAPK基因在OSCC组织中表达改变的机制及肿瘤基因治疗方法打下基础。方法：采用甲基特异性PCR和免疫组织化学方法分别检测23例正常口腔黏膜组织和53例OSCC组织中DAPK基因甲基化率、DAPK蛋白表达率。结果：23例正常口腔黏膜组织中无一例检测到DAPK基因启动子区甲基化，53例OSCC患者30例（56.60%）口腔黏膜组织中DAPK基因启动子区完全甲基化，8例（15.09%）DAPK基因部分甲基化，总甲基化率为71.69%（38/53），与正常口腔黏膜组织甲基化率比较差异有显著性（P<0.01）。在23例（100%）正常口腔黏膜组织中DAPK蛋白表达均呈阳性，53例OSCC患者中36例（67.92%）口腔黏膜组织中DAPK蛋白表达下调，二者比较差异具有显著性（P<0.01）；OSCC患者口腔黏膜组织中DAPK蛋白低表达组DAPK基因甲基化率（32/36,88.89%）高于正常表达组（6/17,35.29%）（P<0.01）。结论：DAPK基因启动子区甲基化是该基因在OSCC组织中表达降低的机制之一，DAPK基因甲基化引起的基因功能静默可能与OSCC的发生有关。

目的：研究孕激素受体（PR）基因多态性与子宫肌瘤易感性的关系。方法：以单核苷酸多态性位点作为遗传标记，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法，检测165例中国汉族子宫肌瘤患者（病例组）和157例非子宫肌瘤健康女性（对照组）PR基因rs1145460位点的基因型。应用拟合优度χ² 检验分析基因型频数分布是否符合Hardy-Weinberg平衡定律；利用SPSS 12.0统计软件分析等位基因和基因型分布与子宫肌瘤的关系。结果：病例组与对照组rs1145460位点基因型频数均符合Hardy-Weinberg平衡定律（P>0.05）；病例组与对照组rs1145460位点基因型（C/C、C/T、T/T）和等位基因（C、T）频数分布比较差异均无显著性（P>0.05）。结论：PR基因rs1145460位点多态性可能与中国北方汉族人群子宫肌瘤发病无关。

目的：探讨原发性肝细胞癌组织中 CD40与胞间黏附分子1（ICAM-1）的表达与原发性肝细胞癌发生、发展的关系。方法：采用免疫组织化学S-P方法检测40例原发性肝细胞癌(简称肝癌)患者癌组织中CD40与ICAM-1的表达情况，并选择其中25例的癌旁正常肝组织(距癌组织≥2 cm) 作为对照。结果：40例肝癌患者癌组织中CD40与ICAM-1表达阳性率（47.5%和82.5%）均明显高于其癌旁正常肝组织（0.0%和8.0%）（P＜0.01）；CD40在肝癌中的阳性表达与肝癌淋巴结转移有关（P＜0.05），与其分化程度无关（P＞0.05）；ICAM-1在肝癌中的阳性表达与肝癌淋巴结转移和分化程度均有关（P＜0.05或P＜0.01）。结论：CD40与ICAM-1 在肝癌组织中均异常表达，可作为判断原发性肝细胞癌侵袭转移及预后的指标，并为原发性肝细胞癌的生物治疗提供实验依据。

目的：探讨血管紧张素I转换酶(ACE)基因多态性与2型糖尿病肾病的关系。方法：2型糖尿病并发肾病组（DN）患者80例，单纯2型糖尿病组（DM）患者60例，60名健康人作对照（正常对照组），抽提每人外周血中白细胞基因组DNA，采用聚合酶链反应（PCR）扩增ACE基因第16 内含子的一个287 bp Ａlu的插入/缺失（I/D） 基因片段,进行1.5%的琼脂糖凝胶电泳,并在紫外线灯下观察荧光带并确认每例的基因型。各组间的基因型频数分布应用Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验和χ²检验。等位基因频数分布应用χ²检验。结果：ACE 基因的3种基因型II、ID和DD的频数分布符合Hardy-Weinberg平衡定律；各组间ACE 基因的基因型频数分布比较差异无显著性（χ² =1.10P>0.05）；3组的等位基因I和D的频数分布比较差异无显著性（χ² =0.84，P>0.05）。结论：ACE 基因多态性与2型糖尿病肾病的发病无关联性。

目的：观察雌激素受体α（ERα）和β (ERβ)在人正常乳腺组织细胞中的定位,为探讨ERα和ERβ与乳腺组织生长发育的关系奠定基础。方法：应用免疫组织化学的方法，检测16例在加拿大拉瓦尔大学附属医院接受乳房缩小成形术患者的正常乳腺组织的ERα和ERβ阳性表达率及分布情况。结果：ERα在小叶上皮细胞和导管上皮细胞的细胞核内检测到，在小叶和小叶内导管分布于上皮细胞的内层，在小叶间导管分布于上皮细胞的外层。ERβ在小叶上皮细胞和导管上皮细胞的细胞核内检测到，但是ERβ在上皮细胞中的分布并无规律，而且在细胞浆内也可以检测到弱到中等强度的染色。同时，在一些间质细胞、血管内皮细胞和淋巴细胞亦出现染色情况。ERβ在乳腺上皮细胞中阳性百分数明显高于ERα的阳性百分数，两者比较差异有显著性（t=29.789，P<0.01）。同时ERβ的阳性表达率明显高于ERα的阳性表达率，两者比较差异有显著性（χ²=8.127,P＜0.05）。结论：雌激素受体各亚型在人正常乳腺组织中有着不同的分布特点，ERβ的广泛分布暗示着ERβ可能是乳腺组织中占优势的雌激素受体。

目的：探索雌激素受体阴性(ER^-)Ⅱ期乳腺浸润性导管癌的蛋白标志物,阐述获得蛋白在肿瘤浸润、转移方面的意义。方法：利用二维凝胶电泳（2-DE）、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)及在线数据库检索，对5例Ⅱ期乳腺浸润性导管ER^-癌组织及癌旁组织的差异表达蛋白质进行鉴定分析。结果：5例癌旁正常乳腺组织中检测出的蛋白点数从779到1 328不等，实体瘤组织中检测出的蛋白点数从988到1 453不等，两者间的匹配点从310到774不等。5例患者乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织的全蛋白差异表达凝胶图谱上确定3个差异蛋白质点S1、S2和S3，鉴定出3个候选蛋白：免疫球蛋白λ链可变区（S1）、胶原蛋白Ⅵ -3链前体（S2）及S100A11钙结合蛋白（S3）。其中S2和S3在5例癌组织中表达均上调（丰度差异2倍以上）。结论：优化的实体瘤组织二维电泳实验条件能够从实体瘤组织中更有效地提取蛋白质；胶原蛋白Ⅵ -3链前体及S100A11钙结合蛋白可能与ER^-Ⅱ期乳腺浸润性导管癌的浸润及转移有关。

目的：探讨免疫球蛋白IgA、IgM、IgD、IgE在卵巢上皮性癌中的表达及表达强度与卵巢上皮性癌病理分级的相关性。方法：应用免疫组织化学法检测卵巢上皮性癌组织芯片(含177例卵巢上皮性癌)、50例卵巢良性肿瘤上皮组织中IgA、IgM、IgD、IgE的表达水平。 结果：卵巢上皮性癌组织中IgA、IgM、IgD、IgE的表达水平均明显高于卵巢良性肿瘤上皮组织 (P<0.001)；卵巢上皮性癌病理分级与IgA、IgM、IgD和IgE的表达强度均呈正相关(r=0.422，P<0.001；r=0.460，P<0.001；r=0.458，P<0.001；r=0.593，P<0.001)即病理分级越高，IgA、IgM、IgD和IgE表达越强。结论:IgA、IgM、IgD、IgE在卵巢上皮性癌组织中高表达；IgA、IgM、IgD、IgE在卵巢上皮性癌组织中的异常表达提示与肿瘤的发生、发展密切相关。

目的：检测卵巢上皮性肿瘤组织中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和微血管密度（MVD）的表达，探讨HIF-1α和MVD在卵巢上皮性肿瘤发生、发展中的作用。方法：237例卵巢上皮性肿瘤患者，包括浆液性囊腺瘤79例、交界性浆液性囊腺瘤12例、浆液性囊腺癌51例、黏液性囊腺瘤67例、交界性黏液性囊腺瘤9例、黏液性囊腺癌19例。其中浆液性囊腺癌和黏液性囊腺癌按FIGO的手术-病理分期为：Ⅰ期13例，Ⅱ期26例，Ⅲ期19例，Ⅵ期12例。采用免疫组织化学方法检测上述卵巢上皮性肿瘤组织中HIF-1α表达和MVD，并将良性肿瘤、交界性肿瘤和恶性肿瘤，以及恶性肿瘤不同分期之间的HIF-1α表达和MVD值进行对比。同时对HIF-1α的表达和MVD值之间的相关性进行分析。结果：卵巢交界性浆液性囊腺瘤较卵巢浆 液性囊腺瘤和黏液性囊腺瘤组织中HIF-1α的阳性率均明显增高(P<0.05)。卵巢浆液性囊腺癌和黏液性囊腺癌组织中HIF-1α表达的阳性率均明显高于两组卵巢良性肿瘤(P<0.05)。卵巢交界性浆液性囊腺瘤和卵巢交界性黏液性囊腺瘤两交界性肿瘤组织中，MVD值均较两良性肿瘤组明显增高(P<0.05)。卵巢浆液性囊腺癌和黏液性囊腺癌组织中MVD值均较两良性肿瘤组和两交界性肿瘤组明显增高(P<0.05)。随着卵巢癌手术-病理分期级别的增高，HIF-1α 表达的阳性率也由Ⅰ期的38.46%逐渐增高至Ⅳ期的83.33%，其中Ⅳ期较Ⅰ期的阳性率明显增高(P<0.05)。随手术-病理分期级别的增高，MVD也增高，各组间比较差异具有显著性(P<0.05)。 不同组织类型及手术病理分期的卵巢上皮性肿瘤组织中，HIF-1α表达与MVD呈正相关关系(r =0.540，P<0.01)。结论：HIF-1α 与卵巢上皮性肿瘤血管形成密切相关，提示HIF-1α可能在促进卵巢上皮性肿瘤的发生、发展起到重要的作用。

目的：研究CD4⁺CD25^high Foxp3⁺调节性T细胞(Tregs)在恶性肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达,探讨其在肿瘤发病中的作用及临床意义。方法：采用流式细胞术检测61例不同分期恶性肿瘤患者PBMC中CD4⁺CD25⁺/CD4⁺CD4⁺CD25^high/CD4⁺T细胞百分比，进一步分析CD4⁺CD25⁺及CD4⁺CD25^highT细胞中表达Foxp3⁺T细胞的百分比，并与正常对照组(n=32)进行比较。结果：与正常对照组比较，Ⅰ及Ⅱ期恶性肿瘤患者PBMC中CD4⁺CD25⁺/CD4⁺及CD4⁺CD25^high/CD4⁺T细胞百分比均无明显变化(P>0.05),Ⅲ及Ⅳ期恶性肿瘤患者均明显增高(P<0.05)，随肿瘤恶性程度增高，CD4⁺CD25⁺/CD4⁺及CD4⁺CD25^high/CD4⁺T细胞的百分比也逐渐增高；恶性肿瘤患者CD4⁺CD25⁺ 及CD4⁺CD25^high Foxp3⁺T细胞表达水平较正常对照组均增高,组间比较差异均有显著性(P< 0.01)。结论:恶性肿瘤患者外周血调节性T细胞增高可能是恶性肿瘤发病及免疫机制异常的主要原因之一，定期检测外周血中上述指标的变化，有利于了解恶性肿瘤患者的病情变化及预后判断。

目的：探讨细胞色素[CYP1A1基因MspⅠ酶切位点多态性与乳腺癌遗传易感性的关系。方法:应用聚合酶链式反应- 限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术，检测160例乳腺癌患者(病例组)和124例同期住院非乳腺癌患者(对照组)， CYP1A1基因MspⅠ酶切位点多态性的3种基因型及等位基因的频数分布。结果：在病例组CYP1A1基因MspⅠ酶切位点基因型频数分布为：TT（45.0％）、TC（46.3％）、CC（8.8％），等位基因频数分布为T（68.1％）、C（31.9％）；在对照组CYP1A1[基因MspⅠ酶切位点基因型的频数分布为TT（61.3％）、TC（35.5％）、CC（3.2％），等位基因频数分布为T（79.0％）、C（21.0％）。各个基因型在两组中所占的比例差异无显著性（P>0.05）;两组T、C等位基因频数比较差异有显著性(P<0.05)。 结论： CYP1A1基因MspⅠ酶切位点多态性可能与本地区乳腺癌易感性有关。

目的：比较糖尿病致下肢动脉硬化闭塞症患者传统内科治疗和经皮球囊血管成形术（PTA）治疗效果，探讨PTA对糖尿病致下肢动脉硬化闭塞症患者治疗价值。方法：40例糖尿病致下肢动脉硬化闭塞症患者，根据患者志愿20例行PTA（PTA组），另20例给予传统内科治疗（对照组），观察两组患者治疗前及治疗6个月后患肢疼痛、冷感、踝动脉收缩压、踝肱指数、血流峰值的变化，并且判断两组治疗6个月的疗效。结果：两组患者治疗前下肢及足部疼痛积分、冷感积分、踝动脉收缩压、踝肱指数、血流速度比较差异均无显著性 (P＞0.05)；治疗6个月后，PTA组患者下肢及足部疼痛积分、冷感积分均低于治疗前及对照组治疗后(P<0.01)，踝动脉收缩压、踝肱指数和下肢动脉血流速度均高于治疗前及对照组治疗后(P<0.01)。治疗6个月后PTA组特校率为85%（17/20），对照组为0；PTA组有效率为95%（19/20），对照组75%（15/20）。PTA组特效率和有效率均高于对照组 (P<0.01)。结论：PTA治疗糖尿病致下肢动脉闭塞症效果明显优于传统内科药物治疗，是一种安全有效的治疗方法。

目的:了解在校本科大学生的强迫性神经症的患病率、分布特征及影响因素，为大学生强迫症的干预与病因学研究提供依据。方法：应用分层按比例随机抽样的方法抽取样本2 046人，采用世界卫生组织复合性国际诊断交谈表3.0（WHO-CIDI-3.0）对在校本科生进行访谈，完成访谈1 869人，共收集合格问卷1 843份，按ICD-10诊断标准筛查大学生强迫症。结果：大学生强迫症的终生患病率为17.1%，12个月患病率为9.9%，30 d患病率为2.5%；男大学生强迫症的终生患病率高于女大学生(χ²=6.107，P=0.013)；不同年级的大学生强迫症的终生患病率存在显著差异（χ²=16.223，P=0.001），低年级高于高年级； 多因素Logistic回归分析发现，大学生年级、性别、父亲心境、母亲心境、童年时期父母间是否经常打骂、童年时期父母对其的照看程度及目前社会交往中与朋友联系程度等7个因素是大学生强迫症的影响因素。结论：在校大学生的强迫症终生患病率较高，大学生强迫症的患病受年级、性别、父亲心境、母亲心境、童年时期父母间是否经常打骂、童年时期父母对其的照看程度及目前社会交往中与朋友联系程度等多个因素的影响，提示大学生强迫症应引起学校、社会及家庭的足够重视并采取积极的干预措施对强迫症进行有效防制。

乳腺癌是少数对于激素治疗敏感的肿瘤之一，内分泌治疗效果明确；他莫西酚（ TAM）是乳腺癌的一线内分泌治疗药物，然而其耐药问题始终困扰着临床医师。CCND1基因是近年来确定的癌基因，在多种肿瘤中具有异常表现，与乳腺癌的关系尤为密切，是近年来研究较为深入的癌基因之一。CCND1基因的表达与乳腺癌的发生、相关标记的表达（激素受体ER）、 TAM治疗敏感性及预后具有相关性。本文作者综述CCND1基因与乳腺癌的关系及CCND1与乳腺癌 TAM治疗敏感性的关系,明确乳腺癌的发生机制及雌激素在乳腺癌中的作用方式。CCND1基因可能成为乳腺癌基因治疗的新靶点，并在乳腺癌患者的内分泌治疗筛选中起到重要作用。

肿瘤是一类严重威胁人类健康和生命的疾病，因此，有关肿瘤早期诊断和治疗一直是科学研究的热点问题。近年针对肿瘤患者的免疫监视功能缺损，以提高树突状细胞（DC）、T细胞及NK细胞介导的肿瘤免疫治疗为策略的癌症治疗方法已经取得了多项进展，基于Flt3配体(FL)免疫治疗就是其中之一。FL是主要表达于造血干细胞/祖细胞上的Ⅲ型酪氨酸激酶受体Flt3的配体，是一种与早期造血调控有关的生长因子。FL联合其他细胞因子，能够在体内外显著地扩增DC，刺激T细胞和NK细胞增殖，为肿瘤免疫治疗提供了良好的基础。目前采用FL治疗乳腺肿瘤、前列腺肿瘤、颅内肿瘤等，已经显示了其在肿瘤免疫治疗领域中的良好临床应用前景。