沉默CD147对前列腺癌LNCaP细胞糖酵解的影响

doi:10.13481/j.1671-587X.20230311

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨CD147对前列腺癌（PCa）LNCaP细胞糖酵解的影响，为PCa临床诊断和治疗提供新的分子标志物和靶点。方法采用慢病毒感染系统建立沉默CD147的细胞作为LNCaP/shCD147组，同时设立阴性对照组（LNCaP/scramble组）。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测2组LNCaP细胞中CD147 mRNA表达水平，试剂盒检测2组LNCaP细胞中乳酸（LA）、丙酮酸（PA）和腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）浓度及2组LNCaP细胞中丙酮酸激酶（PK）、6-磷酸果糖激酶1 （PFK1）和己糖激酶（HK）酶活性，Western blotting 法检测2组LNCaP细胞中CD147、HK2、肌肉磷酸果糖激酶（PFKM）和丙酮酸激酶M2（PKM2）蛋白表达水平。结果与LNCaP/scramble组比较，LNCaP/shCD147组细胞中CD147 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01），表明成功构建沉默CD147的PCa LNCaP细胞模型。与LNCaP/scramble组比较，LNCaP/shCD147组细胞中LA、PA和ATP浓度明显降低（P<0.05或P<0.01）。与LNCaP/scramble组比较，LNCaP/shCD147组细胞中PK、PFK1和HK酶活性明显降低（P<0.05或P<0.01）。Western blotting 法检测，与LNCaP/scramble组比较，LNCaP/shCD147组细胞中HK2蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。结论沉默CD147通过调节糖酵解代谢产物、限速酶活性和相关蛋白表达水平抑制LNCaP细胞糖酵解过程。

关键词: CD147, 糖酵解, 前列腺肿瘤, LNCaP细胞, 己糖激酶2

Abstract:

Objective To discuss the effect of CD147 on the glycolysis of the prostate cancer （PCa） LNCaP cells， and to provide new molecular markers and targets for the clinical diagnosis and treatment of PCa. Methods The lentivirus infection system was used to establish the cells silencing CD147 as LNCaP/shCD147 group， and the negative control group （LNCaP/scramble group） was set up at the same time. The expression levels of CD147 mRNA in the LNCaP cells in two groups were detected by real-time fluorescent quantitative PCR （RT-qPCR）method； the concentrations of lactic acid （LA）， pyruvate （PA），and ATP in the LNCaP cells in two groups were detected by the kits； the activities of pyruvate kinase （PK），6-phosphofructokinase 1 （PFK1） and hexokinase （HK） were detected by the kits，and the expression levels of HK2， phosphofructokinase of muscle（PFKM），and pyruvate kinase M2（PKM2） proteins in the LNCaP cells in two groups were detected by Western blotting method. Results Compared with LNCaP/scramble group， the expression levels of CD147 mRNA and protein in the cells in LNCaP/shCD147 group were significantly decreased（P<0.01）；indicating that the PCa LNCaP cell model with silencing CD147 was successfully constructed.Compared with LNCaP/scramble group， the concentrations of LA， PA， and ATP in the cells in LNCaP/shCD147 group were significantly decreased （P<0.05 or P<0.01）. Compared with LNCaP/scramble group， the activities of PK， PFK1， and HK enzymes in the cells in LNCaP/shCD147 group were decreased （P<0.05 or P<0.01）.The Western blotting results showed that compared with LNCaP/scramble group， the expression level of HK2 protein in the cells in LNCaP/shCD147 group was decreased （P<0.01）. Conclusion Silencing CD147 inhibits the glycolysis of LNCaP cells by regulating the glycolytic metabolites of glycolysis， rate-limiting enzyme activity， and related protein expression levels.

Key words: CD147, Glycolysis, Prostate cancer, LNCaP cells, Hexo kinase 2

中图分类号:

R737.25

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图/表 5

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Group	LA[c_B/(mmol·L^－1)]	PA[w_B/(mg·g^－1)]	ATP[c_B/(mmol·L^－1)]
LNCaP/scramble	0.91±0.12	4.41±0.76	10.34±1.60
LNCaP/shCD147	0.51±0.07^**	2.82±0.42^*	5.99±0.82^*

Group	PK	PFK1	HK
LNCaP/scramble	4.68±0.52	10.43±1.24	5.07±0.57
LNCaP/shCD147	2.19±0.23^*	4.20±0.69^**	2.23±0.37^**

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