研究褪黑素对过氧化氢（H₂O₂）诱导的人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y细胞）氧化应激损伤的保护作用，并探讨其作用机制。

体外培养SH-SY5Y细胞，将SH-SY5Y细胞分为对照组、H₂O₂组、不同浓度褪黑素组和2-苯基-N-乙酰色胺（Luzindole）组。对照组为正常培养SH-SY5Y细胞，H₂O₂组加入含有200 μmol·L^－1 H₂O₂的培养基，不同浓度褪黑素组加入不同浓度（1、5和10 μmol·L^－1）褪黑素和含有200 μmol·L^－1 H₂O₂的培养基，Luzindole组加入50 μmol·L^－1 Luzindole、10 μmol·L^－1褪黑素和含有200 μmol·L^－1 H₂O₂的培养基。采用CCK-8法检测各组SH-SY5Y细胞存活率，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，DCFH-DA荧光探针检测各组细胞中活性氧（ROS）水平，Western blotting法检测各组细胞中微管相关蛋白轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）蛋白表达水平，荧光显微镜观察各组自噬泡荧光强度。

与对照组比较，H₂O₂组SH-SY5Y细胞存活率降低（P<0.01），ROS水平和细胞凋亡率升高（P<0.01）。与H₂O₂组比较，不同浓度褪黑素组SH-SY5Y细胞存活率升高（P<0.05），ROS水平和细胞凋亡率降低（P<0.01），LC3-Ⅱ蛋白表达水平明显升高（P<0.01），10 μmol·L^－1褪黑素组自噬泡荧光强度升高（P<0.05）。与10 μmol·L^－1褪黑素组比较，1 μmol·L^－1褪黑素组和Luzindole组SH-SY5Y细胞存活率明显降低（P<0.05）；1和5 μmol·L^－1褪黑素组及Luzindole组SH-SY5Y细胞中ROS水平和细胞凋亡率升高（P<0.05），SH-SY5Y细胞中LC3-Ⅱ表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）；1 μmol·L^－1褪黑素组和Luzindole组自噬泡荧光强度降低（P<0.05）。

褪黑素可以抑制H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激损伤，具有神经保护作用，其机制可能与降低ROS水平和提高细胞自噬有关。

探讨内质网应激（ERS）及内质网自噬对移植黑色素瘤模型淀粉样蛋白前体蛋白（APP）/早老素1（PS1）小鼠移植瘤生长的抑制作用，并阐明蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）-真核翻译起始因子2α（eIF2α）-活化转录因子4（ATF4）通路在其抑制作用中的可能机制。

体外培养B16细胞，通过皮下注射分别植入C57和APP/PS1小鼠背部皮下，建立C57BL/6J和APP/PS1雄性小鼠移植黑色素瘤模型，作为C57移植瘤组（n=7）和APP/PS1移植瘤组（n=7）。观察2组小鼠出瘤时间并计算肿瘤体积，实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）法检测2组小鼠移植瘤组织中葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、PERK和溶酶体组织蛋白酶L（cathepsin L）mRNA表达水平，Western blotting法检测2组小鼠移植瘤组织中GRP78、PERK、磷酸化PERK（p-PERK）、真核翻译起始因子 2α（eIF2α）、磷酸化eIF2α（p-eIF2α）、活化转录因子 4（ATF4）和内质网自噬标志蛋白FAM134B蛋白表达水平，免疫组织化学法检测移植瘤组织中蛋白质二硫异构酶（PDI）蛋白表达情况，免疫荧光法测定2组小鼠移植瘤组织中腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）水平。

与C57移植瘤组比较，APP/PS1移植瘤组小鼠出瘤时间晚，肿瘤体积小（P<0.05），移植瘤组织中ERS相关基因GRP78和PERK mRNA表达水平升高（P<0.05），移植瘤组织中GRP78、p-eIF2α/eIF2α和ATF4蛋白表达水平及p-PERK/PERK比值均升高（P<0.05）。C57移植瘤组肿瘤细胞胞质内多见黑色素颗粒，为移植瘤组织的形态特征，可见少量棕黄色颗粒，为PDI阳性颗粒；APP/PS1移植瘤组肿瘤细胞胞质内可见少量黑色素颗粒和广泛表达的棕黄色颗粒。与C57移植瘤组比较，APP/PS1移植瘤组小鼠移植瘤组织中内质网自噬标志蛋白FAM 134B蛋白表达水平升高（P<0.05），cathepsin L mRNA表达水平升高（P<0.05），ATP水平降低（P<0.05）。

APP/PS1移植瘤模型小鼠肿瘤生长缓慢，其机制可能与ERS的PERK-eIF2α-ATF4信号通路被激活有关。

探讨不同发育期小鼠卵巢组织中Wnt5a蛋白表达水平，并阐明Wnt5a对卵母细胞自噬的影响。

收集不同发育期小鼠卵巢组织，采用Western blotting法检测Wnt5a蛋白在小鼠围产期卵巢组织中的表达水平，选取新生1 d（1 dpp）小鼠卵巢组织进行免疫荧光染色，将卵母细胞胞质标记物DDX4和颗粒细胞标记物FOXL2（红色）分别与Wnt5a（绿色）和细胞核标记物Hoechst（蓝色）共染后，观察卵母细胞形态和数量。体外培养胚胎期17.5 d（17.5 dpc）小鼠卵巢组织，分为对照组、1 mol·L^－1过表达Wnt5a组（rWnt5a组）、1 mol·L^－1抑制剂IWP2组和1 mol·L^－1抑制剂BOX5组，采用Western blotting法检测各组小鼠卵巢组织中Wnt5a、微管相关蛋白1轻链3（LC3）和P62蛋白表达水平，免疫荧光法观察卵巢卵母细胞数量。

Wnt5a在不同发育阶段小鼠卵巢组织中均有表达，与13.5 dpc组比较，17.5 dpc和1 dpp组Wnt5a蛋白表达水平均明显升高（P<0.05），荧光定位发现目的蛋白Wnt5a与标记物DDX4和FOXL2有重叠部分。Western blotting法检测，与对照组比较，rWnt5a组Wnt5a蛋白表达水平明显升高（P<0.01），抑制剂IWP2组Wnt5a和LC3蛋白表达水平明显降低（P<0.01），抑制剂BOX5组Wnt5a蛋白表达水平明显升高（P<0.01）；与rWnt5a组比较，抑制剂IWP2组LC3蛋白表达水平明显降低（P<0.01），P62蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。免疫荧光染色，与对照组比较，抑制剂IWP2组卵巢中卵母细胞数目减少。

Wnt5a可能通过影响小鼠卵巢内自噬水平调控卵母细胞的存活。

建立人鼻咽癌斑马鱼异种移植瘤模型，探讨姜黄素在体内外对鼻咽癌的抑制作用，为阐明姜黄素抗鼻咽癌的分子机制提供依据。

将鼻咽癌CNE-2细胞分为对照组和细胞膜红色荧光染色剂CM-Dil（CM-Dil）组，连续5 d进行细胞计数，并观察荧光强度变化。采用显微注射法构建鼻咽癌斑马鱼异种移植瘤模型，将斑马鱼胚胎分为对照组、PBS组和模型组，对照组斑马鱼胚胎不予处理，PBS组斑马鱼胚胎注射10 nL PBS缓冲液，模型组斑马鱼胚胎注射10 nL CNE-2细胞悬液，孵育培养后统计各组斑马鱼存活数，采用宏观体式显微镜观察并定量分析模型组斑马鱼体内移植瘤荧光强度，HE染色观察对照组和模型组斑马鱼移植瘤组织形态表现。将受精后天数（dpf）为3 的斑马鱼胚胎暴露于含不同浓度（0、0.625、1.250、2.500、5.000、7.500和10.000 μmol·L^－1）姜黄素的饲养水中，观察斑马鱼死亡数和畸形数并计算斑马鱼死亡率，筛选姜黄素体内用药浓度。采用0、0.625、1.250、2.500和5.000 μmol·L^－1 姜黄素作用于斑马鱼鼻咽癌模型48 h，检测移植瘤生长和转移情况。0、10和20 μmol·L^－1姜黄素作用CNE-2细胞24 h，CCK-8法和划痕实验检测细胞增殖率和迁移率。

与对照组比较，CM-Dil组CNE-2细胞数差异无统计学意义（P>0.05）。实验第5天，与对照组比较，PBS组斑马鱼存活数差异无统计学意义（P>0.05）；与对照组和PBS组比较，模型组斑马鱼存活数明显减少（P<0.01）。模型组斑马鱼体内红色荧光随着时间的延长而增强；与注射后第1天比较，注射后第5天模型组斑马鱼体内红色荧光强度明显增强（P<0.05）。HE染色，模型组斑马鱼切片中的卵黄囊有CNE-2细胞，提示造模成功。浓度小于或等于5.000 μmol·L^－1姜黄素组斑马鱼无死亡及明显毒性反应。与对照组（0 μmol·L^－1 姜黄素组）比较， 2.500和5.000 μmol·L^－1姜黄素组斑马鱼体内移植瘤荧光强度明显降低（P<0.05或P<0.01），5.000 μmol·L^－1姜黄素组发生头尾部转移的斑马鱼数量明显减少（P<0.05）。CCK-8法检测和划痕实验，与对照组（0 μmol·L^－1 姜黄素组）比较，10和20 μmol·L^－1姜黄素组CNE-2细胞增殖率和迁移率明显降低（P<0.05）。

人鼻咽癌CNE-2细胞可以成功植入斑马鱼体内并构建鼻咽癌斑马鱼模型，姜黄素在体内外均能抑制鼻咽癌细胞的增殖和转移，具有良好的抗肿瘤前景。

探讨人脐带间充质干细胞（MSCs）对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响，阐明其可能的作用机制。

分离培养人脐带MSCs，采用光学显微镜观察细胞形态表现，并采用流式细胞仪分析鉴定其表面抗原标记物CD90、CD105、CD34和CD45的表达，以未加一抗仅加二抗的MSCs为平行对照组。将20%和60%浓度的MSCs条件培养基和宫颈癌HeLa细胞共培养72 h，集落形成实验观察MSCs条件培养基作用下HeLa细胞集落的形成能力；CCK-8实验检测HeLa细胞增殖抑制率；流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率；蛋白质印迹法检测MSCs条件培养基作用下HeLa细胞增殖和凋亡相关基因蛋白表达水平。

脐带分离细胞接种72 h后有少量细胞贴壁，1周后逐渐变成扁平单层细胞，呈簇状和旋涡状生长，伴随细胞密度增加，细胞体随之变细长，形态与成纤维细胞类似。MSCs细胞表面抗原标记物CD90和CD105呈阳性表达，CD34和CD45呈阴性表达，符合干细胞表型。集落形成实验，加入20%和60%的MSCs条件培养基，宫颈癌HeLa细胞集落形成的抑制率分别为18.56%和37.64%。与对照组比较，MSCs处理48 h后宫颈癌HeLa细胞早期凋亡率升高（P<0.05）。MSCs处理0、24和48 h后HeLa细胞中半胱天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）和P53蛋白表达水平持续升高（P<0.05），B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）蛋白相对表达水平持续降低（P<0.05）。

MSCs体外可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖，并诱导HeLa细胞凋亡，其机制可能与上调促凋亡分子caspase-3与P53表达、下调抗凋亡因子Bcl-2表达有关。

探讨芦丁对人结肠癌（CRC）SW480细胞凋亡的影响，阐明芦丁在CRC治疗中的作用及其可能的分子机制。

毒性与基因比较数据库（CTD）和GeneCards数据库预测与芦丁相关的交集mRNA，基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据库预测交集mRNA的生物学功能及作用通路，采用String数据库寻找与Notch-1相关作用蛋白；以人CRC SW480细胞作为研究对象，分别给予0.1、1.0和10.0 μmol·L^－1 γ-分泌酶抑制剂DAPT初步筛选，进而给予1、2、4、8和10 μmol·L^－1 DAPT干预，筛选出芦丁与DAPT的最适给药浓度。实验分为空白对照组、芦丁组（22 μmol·L^－1）、 DAPT组（1 μmol·L^－1）和芦丁+DAPT组（22 μmol·L^－1芦丁+1 μmol·L^－1 DAPT）；MTT法检测SW480细胞增殖活性，Hoechst33258核染色观察各组细胞凋亡形态，流式细胞术检测各组SW480细胞凋亡率，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中Notch-1 mRNA表达水平，Western blotting法检测各组细胞中，Notch-1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（caspase-3）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（caspase-9）、B细胞淋巴瘤（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白表达水平。

CTD和GeneCards数据库共有芦丁的34个交集mRNA；GO和KEGG数据库预测出交集mRNA与CRC细胞凋亡过程相关；String数据库中与Notch-1相关蛋白16个［相互作用分数（score）>0.42］；芦丁与DAPT的最适给药浓度分别为22 μmol·L^－1和1 μmol·L^－1。与空白对照组比较，芦丁组、DAPT组和芦丁+DAPT组细胞凋亡率明显升高（P<0.05），细胞中Notch-1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.05），细胞中caspase-3、caspase-9和Bax蛋白表达水平均明显升高（P<0.05），Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。芦丁组与DAPT组细胞凋亡率比较差异无统计学意义（P>0.05）。与芦丁组和DAPT组比较，芦丁+DAPT组细胞凋亡率明显升高（P<0.05），caspase-3、caspase-9和Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05），而Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。

生物信息学分析及实验研究结果均表明芦丁能促进CRC细胞凋亡，这一作用可能是通过靶向调控Notch-1调节丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路来实现的。

探讨阿托伐他汀（ATO）对氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）/β2糖蛋白Ⅰ（β2GPⅠ）/抗β2糖蛋白Ⅰ抗体（anti-β2GPⅠ）复合物引发的血管内皮细胞损伤的改善作用以及对TRAF3-相互作用蛋白2（TRAF3IP2）/Ikappa B激酶（IKK）/核因子κB（NF-κB）信号通路的影响，阐明ATO改善抗磷脂综合征（APS）背景下血管内皮细胞损伤的可能分子机制。

通过给予人脐静脉内皮细胞（HUVECs） β2GPⅠ（100 mg·L^―1）、Ox-LDL（50 mg·L^―1）、β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ（100 mg·L^―1）、Ox-LDL/β2GPⅠ和Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ复合物建立血管内皮细胞损伤模型。实验分为对照组、β2GPⅠ组、Ox-LDL组、β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组、Ox-LDL/β2GPⅠ组、Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组、ATO（10 μmol·L^―1）+Ox-LDL/β2GPⅠ组和ATO+Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组。采用MTT法检测HUVECs存活率，化学荧光探针法检测各组HUVECs中活性氧（ROS）荧光强度，ELISA法检测各组HUVECs中内皮素1（ET-1）水平，Western blotting法检测各组HUVECs中TRAF3IP2、p-IKKγ和p-NF-κB p65蛋白表达水平。

与对照组比较，Ox-LDL/β2GPⅠ组和Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组HUVECs存活率明显降低（P<0.01）；与Ox-LDL/β2GPⅠ组和Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组比较，ATO预处理1 h后，ATO+Ox-LDL/β2GPⅠ组和ATO+Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组HUVECs存活率明显升高（P<0.05）。与对照组比较，Ox-LDL/β2GPⅠ组和Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组HUVECs中ROS荧光强度和ET-1水平均明显升高（P<0.01），HUVECs中TRAF3IP2、IKKγ及Phospho-NF-κB p65蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）；与Ox-LDL/β2GPⅠ组和Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组比较，ATO预处理HUVECs 1 h 后，ATO+Ox-LDL/β2GPⅠ组和ATO+Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组HUVECs中ROS荧光强度，ET-1水平，TRAF3IP2、IKKγ和Phospho-NF-κB p65蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。

降血脂药物ATO可改善Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ诱导的血管内皮功能紊乱，其机制与下调TRAF3IP2/IKK/NF-κB信号通路有关。

探讨沉默结直肠癌（CRC）细胞中布卢姆综合征解旋酶（BLM）基因表达对伊立替康（即CPT-11）化疗敏感性的影响，并阐明其相关作用机制。

体外培养HT-29、Lovo、HCT-116、RKO和DLD1细胞，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blotting法筛选高表达BLM mRNA和蛋白的RKO和DLD1细胞。将携带shRNA的慢病毒载体感染细胞以沉默RKO与DLD1细胞中的BLM表达，CCK-8法检测感染后各组CRC细胞存活率和CPT-11半数抑制浓度（IC₅₀）值。将RKO或DLD1细胞分为LV-shNC组（感染LV-shNC的细胞）、CPT-11+LV-shNC组（CPT-11处理感染LV-shNC的细胞）和CPT-11+LV-shBLM组（CPT-11处理感染LV-shBLM的细胞）。流式细胞术检测不同细胞周期各组CRC细胞百分率，Western blotting法检测各组CRC细胞中兔抗B细胞淋巴瘤/白血病2关联死亡启动子（Bad）、裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）、周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）、周期蛋白依赖性激酶6（CDK6）和细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A（p21）蛋白表达水平，流式细胞术检测各组细胞凋亡率。构建异体移植瘤模型，检测各组小鼠肿瘤体积和肿瘤组织中BLM、K-i67及TUNEL的阳性表达率。

与HT-29、Lovo或HCT-116细胞比较，RKO和DLD1细胞中BLM mRNA和蛋白表达水平均升高（P<0.05）；与感染LV-shNC的RKO或DLD1细胞比较，感染LV-shBLM慢病毒后，RKO或DLD1细胞中BLM mRNA表达水平降低（P<0.05）。与LV-shNC组比较，CPT-11+LV-shNC组和CPT-11+LV-shBLM组细胞存活率和IC₅₀值降低（P<0.05）。与LV-shNC组比较，CPT-11+LV-shNC组和CPT-11+LV-shBLM组G₀/G₁期和S期细胞百分率及细胞凋亡率均升高（P<0.05），而G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05），细胞中Cyclin D1，CDK4、CDK6和Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.05），而p21、Bax、Bad和cleaved caspase-3蛋白表达水平均升高（P<0.05）；与CPT-11+LV-shNC组比较，CPT-11+LV-shBLM组G₀/G₁期和S期细胞百分率及细胞凋亡率均升高（P<0.05），而G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05），细胞中Cyclin D1、CDK4、CDK6和Bcl-2蛋白表达水平均明显降低（P<0.05），而p21、Bax、Bad和cleaved caspase-3蛋白表达水平均升高（P<0.05）。裸鼠移植瘤实验，与LV-shNC组比较，CPT-11+LV-shNC组和CPT-11+LV-shBLM组裸鼠肿瘤体积缩小（P<0.05），肿瘤组织中BLM及Ki-67的阳性表达率均降低（P<0.05），TUNEL阳性表达率升高（P<0.05）；与CPT-11+LV-shNC组比较，CPT-11+LV-shBLM组裸鼠肿瘤体积缩小（P<0.05），肿瘤组织中BLM和Ki-67的阳性表达率均降低（P<0.05），TUNEL阳性表达率明显升高（P<0.05）。

沉默CRC细胞中BLM表达可能通过抑制肿瘤细胞的周期进展，从而促进化疗药物CPT-11诱导的细胞凋亡，最终在体内外改善CRC细胞的化疗抵抗。

比较胡桃醌对人乳头瘤病毒（HPV）阳性宫颈癌Caski细胞、HPV阴性C33A细胞和敲减脯氨酰顺反异构酶1（Pin1）基因的Caski细胞（shCaski细胞）增殖的抑制作用，探讨其可能的作用机制。

构建表达Pin1 shRNA慢病毒载体用于感染细胞，筛选得到稳定的shCaski细胞。取对数生长期的Caski、shCaski和C33A细胞，分为正常对照组、10、20、50和100 μmol·L^－1胡桃醌组，胡桃醌处理24 h后，采用MTT法检测各组的细胞增殖活性。取对数生长期的Caski细胞和C33A细胞，分为对照组和20 μmol·L^－1胡桃醌组，各组细胞处理24 h后，流式细胞术检测各组不同周期细胞百分率和早期凋亡率，Hoechst33258荧光染色观察各组细胞形态表现，Western blotting法检测各组细胞周期和凋亡相关蛋白表达水平。

MTT实验，与正常对照组比较，不同浓度胡桃醌组Caski细胞增殖活性明显降低（P<0.05或P<0.01）； 50和100 μmol·L^－1胡桃醌组C33A和shCaski细胞增殖活性明显降低（P<0.05）。Hoechst 33258染色，与对照组比较，20 μmol·L^－1胡桃醌组Caski细胞和C33A细胞中均可观察到核碎解增加，Caski细胞核碎解数量较C33A细胞多。流式细胞术检测，与对照组比较，20 μmol·L^－1胡桃醌组Caski细胞G₂期细胞百分率明显升高（P<0.01），20 μmol·L^－1胡桃醌组C33A细胞G₂期细胞百分率差异无统计学意义（P>0.05）；与对照组比较，20 μmol·L^－1胡桃醌组Caski细胞早期凋亡率明显升高（P<0.01），20 μmol·L^－1胡桃醌组C33A细胞早期凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）；Western blotting法检测，与C33A细胞比较，Caski细胞中Pin1蛋白表达量明显升高；胡桃醌组Caski细胞和shCaski细胞中Pin1蛋白表达量明显低于对照组；与对照组比较，胡桃醌组C33A细胞中细胞周期相关蛋白表达水平明显改变；Caski细胞中磷酸化ATM（Patm）、磷酸化细胞周期检查点激酶２（pChk2）、216位丝氨酸磷酸化细胞分裂周期蛋白25c（pCdc25c Ser216）和pCdc25c Tyr216蛋白表达量升高，磷酸化细胞分裂周期蛋白25c（pCdc25c）蛋白表达量降低，Cdk1蛋白表达量变化不明显；与对照组比较，胡桃醌处理组Caski细胞中Bcl-2蛋白和线粒体CytC蛋白表达量降低，胞质CytC、Bax、Cleaved Caspase-3和Cleaved PARP蛋白表达量升高。

胡桃醌对HPV阳性宫颈癌细胞增殖抑制及促凋亡作用效果均强于HPV阴性细胞，其机制可能与胡桃醌特异性抑制Pin1基因有关。

探讨N6-甲基腺嘌呤（m6A）甲基化修饰结合蛋白YTH结构域连接蛋白2（YTHDF2）在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中表达及其对食管癌细胞生物学行为的影响，阐明其可能的作用机制。

免疫组织化学法检测113例ESCC组织和95例癌旁正常食管上皮组织中YTHDF2蛋白表达情况，分析YTHDF2蛋白表达与ESCC患者临床病理特征和预后的关系。将体外培养的食管癌Eca109和EC9706细胞分为对照组（转染si-NC）和si-YTHDF2组（分别转染si-YTHDF2#1和si-YTHDF2#2）。Western blotting法检测各组细胞中YTHDF2蛋白表达水平，CCK-8法检测各组细胞增殖能力，平板克隆实验检测各组细胞克隆形成数，Transwell小室实验检测各组细胞中迁移细胞数。

YTHDF2蛋白主要表达于ESCC细胞的细胞质，少量表达于细胞核，其在ESCC组织中的表达强度明显高于癌旁正常食管上皮组织（P<0.01）。不同发病年龄和 TNM分期ESCC患者间YTHDF2蛋白表达强度比较差异有统计学意义（P=0.008，P=0.041）。Kaplan-Meier 生存分析，与YTHDF2低表达组比较，YTHDF2高表达组ESCC患者生存率明显降低（P=0.035）。CCK-8法和平板克隆实验，与对照组比较，si-YTHDF2#1组和si-YTHDF2#2组食管癌细胞的增殖活性明显降低（P<0.05），克隆形成数明显减少（P<0.01）。Transwell 小室实验，与对照组比较，si-YTHDF2#1组和si-YTHDF2#2组食管癌细胞中迁移细胞数明显减少（P<0.01）。

YTHDF2在ESCC组织中的表达强度明显高于正常食管上皮组织，敲低YTHDF2表达可抑制食管癌细胞的增殖、克隆形成和迁移。

观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi） 丙戊酸（VPA）单独或联合X射线照射对人三阴性乳腺癌（TNBC）MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用，并分析联合照射对MDA-MB-231细胞凋亡和自噬的影响。

将处于对数生长期的MDA-MB-231细胞分为对照组、不同浓度（2.5、5.0、10.0、20.0和40.0 mmol·L^－1）VPA组、4 Gy X射线照射组和不同浓度（2.5、5.0、10.0、20.0和40.0 mmol·L^－1）VPA联合4 Gy X射线照射组。于作用24、48和72 h后，采用CCK-8法检测各组MDA-MB-231细胞增殖率。MDA-MB-231细胞分为对照组、4 Gy X射线照射组、5 mmol·L^－1 VPA组、5 mmol·L^－1 VPA 联合4 Gy X射线照射组。于作用24和48 h后，流式细胞术检测各组MDA-MB-231细胞凋亡率和自噬率。

与对照组比较，VPA组和VPA联合4 Gy X射线照射组MDA-MB-231细胞增殖率均明显降低（P<0.01），且呈浓度和时间依赖性；与4 Gy X射线照射组比较，VPA联合4 Gy X射线照射组MDA-MB-231细胞增殖率均明显降低（P<0.01）。作用24 h后，2.5 mmol·L^－1 VPA 联合 4 Gy X射线照射组MDA-MB-231细胞增殖率低于2.5 mmol·L^－1 VPA组（P<0.05）；作用72 h后，2.5 和10.0 mmol·L^－1 VPA 联合 4 Gy X射线照射组MDA-MB-231细胞增殖率低于2.5 和10.0 mmol·L^－1VPA组（P<0.05）。5.0 mmol·L^－1VPA单独或联合4 Gy X射线作用MDA-MB-231细胞24和48 h后，与对照组比较，4 Gy X射线照射组、5.0 mmol·L^－1VPA组和5.0 mmol·L^－1VPA联合4 Gy X射线照射组MDA-MB-231细胞凋亡率和自噬率均明显升高（P<0.05或P<0.01）。与4 Gy X射线照射组比较，5.0 mmol·L^－1VPA联合4 Gy X射线照射组MDA-MB-231细胞凋亡率和自噬率均明显升高（P<0.01）。作用48 h后，与5.0 mmol·L^－1VPA组比较，5.0 mmol·L^－1 VPA联合4 Gy X射线照射组MDA-MB-231细胞自噬率升高（P<0.05）。

VPA对MDA-MB-231细胞具有增殖抑制作用，并呈现浓度和时间依赖性，且VPA和X射线的联合抑制效果更优，其机制可能是二者联合引起细胞凋亡和自噬增加。

探讨人参组培不定根蛋白（GARP）对小鼠的抗疲劳作用，阐明其作用机制，为开发利用人参组培不定根资源提供实验依据。

40只昆明种清洁级小鼠采用负重游泳实验建立疲劳动物模型，随机分为对照组，低、中和高剂量（0.25、0.50和1.00 g·kg^－1）GARP组，每组10只。通过力竭游泳实验记录各组小鼠游泳时间，游泳实验后处死小鼠，采用分光光度法检测各组小鼠血清中血乳酸（BLA）和血尿素氮（BUN）水平，采用分光光度法检测各组小鼠肝组织中谷胱甘肽（GSH）水平、超氧化物歧化酶（SOD）活性和肝糖原水平，采用分光光度法检测各组小鼠肌肉组织中肌糖原水平。小鼠成肌细胞（C2C12细胞）分为对照组和不同剂量（5、10和20 mg·L^－1）GARP组，采用分光光度法检测各组细胞中GSH水平、SOD活性和糖原水平，苯酚硫酸法检测各组细胞葡萄糖摄取能力，Western blotting法检测各组细胞中腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）的磷酸化水平［磷酸化AMPK（p-AMPK）/AMPK比值］和葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）蛋白表达水平。

与对照组比较，中和高剂量GARP组小鼠游泳时间明显延长（P<0.05或P<0.01），血清中BLA和BUN水平明显降低（P<0.05或P<0.01）；不同剂量GARP组小鼠肝组织中GSH水平和SOD活性明显升高（P<0.05或P<0.01），肝糖原和肌糖原水平均明显升高（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较，不同剂量GARP组细胞中GSH水平、SOD活性和糖原水平明显升高（P<0.05或P<0.01），细胞的葡萄糖摄取能力明显增强（P<0.05或P<0.01），p-AMPK/AMPK比值和GLUT4蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。

GARP具有抗疲劳作用，其机制可能是通过激活AMPK/GLUT4信号通路促进糖摄取实现的。

探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）抑制剂SB303580（SB）对小鼠慢性阻塞性肺疾病（COPD）进展的影响，并阐明其可能的作用机制。

将48只C57BL/6小鼠分为对照组、SB组、COPD组和COPD+SB组，每组12只。COPD组和COPD+SB组小鼠给予香烟烟雾和脂多糖（LPS）建立COPD模型。吸入乙酰甲胆碱（Mch）后观察各组小鼠气道阻力以评价各组小鼠肺功能，HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现，细胞计数法和ELISA法检测各组小鼠肺泡灌洗液（BALF）中白细胞总数、中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞数及肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素18（IL-18）水平，体外应用烟草提取物（CSE）刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞，将细胞分为对照组、SB组、CSE组和SB+CSE组。细胞免疫荧光染色观察各组巨噬细胞中NOD样受体蛋白3（NLRP3）及裂解型半胱氨酸蛋白酶3（cleaved caspase-3）的表达，流式细胞术检测各组细胞焦亡率和早期凋亡率，Western blotting法检测各组小鼠肺组织和巨噬细胞中磷酸化p38（p-38）、焦亡相关蛋白和核因子κB（NF-κB）信号通路相关蛋白表达水平。

成功构建COPD小鼠模型。与对照组比较，COPD组和COPD+SB组小鼠气道阻力，BALF中白细胞总数、中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞数量及TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18水平以及肺组织中p-p-38、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶1（caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、NF-κB p65及Toll样受体4（TLR4）蛋白表达水平均明显升高（P<0.05或P<0.01）；肺组织结构明显受损，气道上皮细胞脱落，部分相邻肺泡融合至肺大泡等病理学改变。与对照组比较，SB组小鼠气道阻力，BALF中白细胞总数、中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞数及TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18水平和肺组织中NLRP3、caspase-1、ASC、NF-κB p65及TLR4蛋白表达水平均无明显改变（P>0.05）；肺组织结构正常，但肺组织中p-p-38蛋白表达水平降低（P<0.05）。与COPD组比较，COPD+SB组小鼠气道阻力，BALF中白细胞总数、中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞数量及TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18水平和肺组织中NLRP3、caspase-1、ASC、NF-κB p65及TLR4蛋白表达水平均降低（P<0.05），肺组织病理损伤明显减轻。体外实验，与对照组比较，CSE组和CSE+SB组巨噬细胞中NLRP3和cleaved caspase-3的表达增多、细胞焦亡率、早期凋亡率及细胞中p-p-38、ASC、NF-κB p65、TLR4和cleaved caspas-3蛋白表达水平均升高（P<0.05或P<0.01）；SB组巨噬细胞的细胞焦亡率、早期凋亡率和细胞中NLRP3、cleaved caspase-3、ASC、NF-κB p65、TLR4及cleaved caspas-3蛋白表达水平均无明显变化（P>0.05），但p-p-38蛋白表达水平降低（P<0.05）。与CSE组比较，CSE+SB组巨噬细胞的早期凋亡率和细胞中cleaved caspase-3表达水平明显升高（P<0.05），细胞焦亡率及细胞中p-p-38、NLRP3、ASC、NF-κB p65、TLR4及cleaved caspas-3蛋白表达水平降低（P<0.05）。

SB可能通过抑制NLRP3途径介导巨噬细胞焦亡，改善COPD肺损伤和炎症反应。

探讨棕榈酸（PA）对骨骼肌细胞脂质沉积的作用及其最佳作用浓度和时间。

在C2C12细胞生长至70%~80%时分为对照组和不同浓度（50、75、100和125 μmol·L^－1）PA组。不同浓度PA组细胞采用含不同浓度PA的生长培养基培养，对照组细胞不给予PA（0 μmol·L^－1 PA）。CCK-8法检测各组细胞增殖活性，定量检测细胞中甘油三酯（TG）水平，油红O染色观察细胞中脂滴形成情况，2%马血清诱导细胞分化并评价各组C2C12细胞分化状态。

与对照组比较，50、75和100 μmol·L^－1 PA组C2C12细胞增殖活性差异无统计学意义（P>0.05），125 μmol·L^－1 PA组C2C12细胞增殖活性明显降低（P<0.01），50、75和100 μmol·L^－1 PA组细胞中TG水平升高（P<0.01），100 μmol·L^－1PA组C2C12细胞中TG水平升高最明显（P<0.01）；与培养24 h比较，100 μmol·L^－1 PA培养48 h后，C2C12细胞中TG水平升高（P<0.01）。分化培养后，PA组和对照组C2C12细胞中均有较多肌管形成。

100 μmol·L^－1 PA作用48 h可有效促进C2C12细胞脂质沉积。

探讨不同浓度贝母素乙（PMI）对人肺癌A549细胞凋亡的影响，阐明其可能的分子机制。

采用不同浓度PMI（0.025、0.050、0.100、0.200和0.400 mmol·L^－1）分别处理A549细胞24、48和72 h，MTT法检测A549细胞增殖活性，并计算半数抑制浓度（IC₅₀）。不同浓度PMI（0.050、0.100、0.200 mmol·L^－1）或0.200 mmol·L^－1 PMI联合p38 MAPK抑制剂SB203580处理A549细胞48 h后，细胞分为空白对照组、不同浓度（0.050、0.100和0.200 mmol·L^－1）PMI组和联合组（0.200 mmol·L^－1 PMI + 20 μmol·L^－1 SB203580）。Annexin Ⅴ-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率，Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和cleaved-caspase-3及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）/p53信号通路相关蛋白磷酸化p38MAPK （p-p38MAPK）（Thr180/Thr182）、p-p53（ser15）、p53、PUMA和小鼠双微体2（MDM2）表达水平，免疫荧光实验观察各组细胞中p53蛋白定位情况。

与对照组比较，0.10和0.20 mmol·L^－1 PMI组A549细胞存活率降低（P<0.05），细胞凋亡率升高（P<0.05），细胞中Bax、cleaved-caspase-3、p-p38MAPK（Thr180/Thr182）、p-p53（ser15）、p53和PUMA蛋白表达水平均升高（P<0.05），Bcl-2和MDM2蛋白表达水平均降低（P<0.05）。与0.20 mmol·L^－1 PMI组比较，联合组A549细胞存活率升高（P<0.05），细胞凋亡率降低（P<0.05），细胞中Bax、cleaved-caspase-3p-p38MAPK（Thr180/Thr182）、p-p53（ser15）、p53和PUMA蛋白表达水平均降低（P<0.05），Bcl-2和MDM2蛋白表达水平均升高（P<0.05）。免疫荧光检测，p53蛋白存在由细胞质向细胞核转移的现象，且p53蛋白在细胞质和细胞核均有表达。

PMI可诱导A549细胞凋亡，其分子机制可能与p38 MAPK/p53信号通路介导的细胞凋亡有关。

研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi）丁酸钠（NaBt）单独或联合X射线照射对人非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞凋亡的影响，并阐明其作用机制。

处于对数生长期的A549细胞分为对照组、NaBt组、4 Gy X射线照射组和NaBt联合4 Gy X射线照射组。照射后24和48 h，采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率；照射后6 h，采用流式细胞术检测各组细胞的线粒体膜电位（Δψm）和活性氧（ROS）水平；照射后24 h，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）和p21 mRNA表达水平。

照射后24和48 h，与对照组、4 Gy X射线照射组和NaBt组比较，NaBt联合4 Gy X射线照射组细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）；照射后48 h，与对照组比较，NaBt组细胞凋亡率明显升高（P<0.01）。NaBt单独或联合4 Gy X射线作用A549细胞6 h后，与对照组、4 Gy X射线照射组和NaBt组比较，NaBt联合4 Gy X射线照射组细胞Δψm均明显降低（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较，NaBt组和NaBt联合4 Gy X射线照射组细胞中ROS水平均明显升高（P<0.05）；与4 Gy X射线照射组比较，NaBt联合4 Gy X射线照射组细胞中ROS水平升高（P<0.05）。NaBt单独或联合4 Gy X射线作用A549细胞24 h后，与对照组、4 Gy X射线照射组和NaBt组比较，NaBt联合4 Gy X射线照射组细胞中caspase-3 和p21 mRNA表达水平均明显升高（P<0.01）；与对照组比较，NaBt组和4 Gy X射线照射组细胞中p21 mRNA水平均明显升高（P<0.01）。

NaBt可以诱导A549细胞凋亡，其机制可能涉及到线粒体凋亡通路的调控。

探讨肿瘤相关巨噬细胞（TAM）极化状态对前列腺癌（PCa）干细胞自我更新能力与血管生成拟态的影响，阐明TAM在PCa进展中的作用。

从人PCa细胞系DU145中分选出PCa干细胞，将人单核白血病细胞株THP-1诱导为M2型TAM，作为诱导组，并以未诱导的THP-1细胞作为对照组，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测细胞中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和重组人精氨酸酶1（Arg-1）mRNA表达水平。实验分为PCa-肿瘤干细胞（CSC）组（常规培养基培养PCa干细胞）、THP-1+PCa-CSC组（未诱导的THP-1细胞的培养液上清培养PCa干细胞）和TAM+PCa-CSC组（诱导处理的THP-1细胞的TAM条件培养基培养PCa干细胞），模拟微环境建立TAM与PCa干细胞共培养体系，培养48 h后，通过细胞成球实验检测各组PCa干细胞成球情况，细胞克隆形成实验检测各组PCa干细胞集落数目，细胞划痕实验检测各组PCa干细胞划痕愈合率，Transwell小室实验检测各组PCa干细胞侵袭数目，血管生成拟态形成实验检测各组PCa干细胞管状结构数目。

人PCa细胞系DU145经分选后获得CD44+CD133+标记的干细胞。与对照组比较，诱导组THP-1细胞形态呈不规则多边形，iNOS mRNA表达水平降低（t=21.021， P<0.05），Arg-1 mRNA表达水平升高（t=26.153，P<0.05），CD86蛋白表达水平降低（t=34.556， P<0.05），CD206蛋白表达水平升高（t=31.095，P<0.05）；与PCa-CSC组比较，THP-1+PCa-CSC组和TAM+PCa-CSC组细胞球体积变大，细胞集落数目增加（P<0.05），划痕愈合率升高（P<0.05），细胞侵袭数目增加（P<0.05），细胞管状结构数目增加（P<0.05）；与THP-1+PCa-CSC组比较，TAM+PCa-CSC组细胞球体积进一步变大，细胞集落数目和细胞侵袭数目均增加（P<0.05），划痕愈合率升高（P<0.05），细胞管状结构数目增加（P<0.05）。

通过调控TAM极化状态可诱导PCa干细胞转移，进一步促进其自我更新与血管生成拟态形成。

观察通管消癥饮（TGXZ）对输卵管炎性不孕症大鼠的影响，探讨其可能的分子机制。

选取6~8周龄SD雌性大鼠92只，采用混合菌阴道接种法构建输卵管炎性不孕症大鼠模型。将造模成功的60只大鼠随机分为模型组、西药组（甲硝唑片和盐酸左氧氟沙星胶囊）、低剂量TGXZ组（5.33 g·kg^－1）、中剂量TGXZ组（10.67 g·kg^－1）和高剂量TGXZ组（21.33 g·kg^－1），每组12只，另取12只正常大鼠作为正常对照组。所有实验动物每日灌胃2次，早晚各1次，共1剂，共灌胃30 d。观察并记录大鼠精神状态、活动量、饮水量和爪色等情况，采用ELISΑ法测定各组大鼠血清中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素10（IL-10）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平，苏木精-伊红（HE）染色法观察各组大鼠输卵管组织病理形态表现，蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测各组大鼠输卵管组织中Toll样受体4（TLR4）/核因子κB（NF-κB）信号通路相关蛋白表达水平；观察各组大鼠受孕率。

正常对照组大鼠精神状态良好，活动量和饮水量正常，爪色粉白；模型组大鼠精神状态萎靡，活动量和饮水量降低，爪色暗红；中剂量TGXZ组、高剂量TGXZ组和西药组大鼠的一般情况得到明显改善，大鼠精神状态恢复，活动量和饮水量增加，爪色颜色变浅。与正常对照组比较，模型组大鼠血清炎症因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平明显升高（P<0.05），输卵管组织炎性细胞浸润评分明显升高（P<0.05），输卵管组织中TLR4、磷酸化NF-κB抑制剂α（p-IκBα）和NF-κB p65蛋白表达水平明显升高（P<0.05），IκBα蛋白表达水平明显降低（P<0.05），大鼠受孕率明显降低（P<0.05）；与模型组比较，中和高剂量TGXZ组及西药组大鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平明显降低（P<0.05），输卵管组织炎性细胞浸润评分明显降低（P<0.05），输卵管组织中TLR4、p-IκBα和NF-κB p65表达水平均明显降低（P<0.05），IκBα表达水平明显升高（P<0.05），大鼠受孕率明显提高（P<0.05），而低剂量TGXZ组大鼠的以上指标差异无统计学意义（P>0.05）；与低剂量TGXZ组比较，中和高剂量TGXZ组大鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平，输卵管组织炎性细胞浸润评分，输卵管组织中TLR4、p-IκBα和NF-κB p65蛋白表达水平均明显降低（P<0.05），IκBα蛋白表达水平和大鼠受孕率明显升高（P<0.05）。

TGXZ能有效降低输卵管炎性不孕症大鼠血清炎症因子水平，其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路活性有关。

构建淋巴细胞活化因子3（LAG3）-mCherry红色荧光蛋白的LAG3-mCherry慢病毒表达载体，转染HEK293T细胞获得稳定表达LAG3-mCherry融合蛋白的细胞系，探讨LAG3-mCherry融合蛋白在HEK293T细胞中的定位。

将LAG3质粒和带有mCherry的慢病毒载体分别用限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ进行双酶切，构建pEZ-LAG3-mCherry表达载体。将测序正确的质粒利用Lipofectamine 3000转染HEK293T细胞，利用荧光显微镜观察LAG3-mCherry在HEK293T细胞中的表达定位，Western blotting法检测LAG3-mCherry融合蛋白的表达情况。

酶切鉴定结果，电泳后重组质粒双酶切后可见约为8 012和2 066 bp大小的2条DNA条带，与 pEZ-Lv-mCherry 载体及LAG3基因片段大小相符；DNA测序结果，LAG3基因成功插入到慢病毒表达载体中。荧光显微镜观察，LAG3-mCherry融合蛋白主要在HEK293T细胞膜上表达，少量蛋白滞留在细胞质中。Western blotting法检测，在转染pEZ-LAG3-mCherry质粒中检测到LAG3对应特异性条带。

成功构建了LAG3-mCherry慢病毒表达载体pEZ-LAG3-mCherry。通过稳定转染成功制备了稳定表达LAG3-mCherry的细胞系。LAG3-mCherry融合蛋白主要分布于 HEK293T细胞的细胞膜上。

探讨舒芬太尼对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠心肌细胞凋亡及长链非编码RNA（LncRNA）-肺癌转移相关转录本1（MALAT1）靶向细胞外信号调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）信号通路的影响，阐明舒芬太尼对MIRI大鼠的可能作用机制。

30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和舒芬太尼组，每组10只。采用结扎左冠状动脉前降支（LAD）的方法制备MIRI模型，假手术组只开胸不结扎，舒芬太尼组大鼠于再灌注前10 min时尾静脉注射舒芬太尼1 μg?kg^－1，假手术组和模型组大鼠分别尾静脉注射等量生理盐水。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法及荧光探针原位杂交（FISH）法检测各组大鼠心肌组织中LncRNA-MALAT1表达水平，原位末端标记（TUNEL）染色法检测各组大鼠心肌细胞凋亡率，Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、活化半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved-caspase-3）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、ERK1/2和磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白表达水平。构建心肌细胞缺氧复氧模型模拟体内MIRI，分为对照组、模型组、舒芬太尼组、pcDNA-MALAT1组（MALAT1组）和舒芬太尼+pcDNA-MALAT1组（舒芬太尼+MALAT1组）。H9C2细胞缺氧培养10 h后复氧构建缺氧复氧损伤模型；采用Western blotting法检测各组H9C2细胞中caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平。

动物实验，与假手术组比较，模型组大鼠心肌组织中LncRNA-MALAT1表达水平、心肌细胞凋亡率、cleaved-caspase-3蛋白表达水平和Bax/Bcl-2比值均明显升高（P<0.05），p-ERK1/2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）；与模型组比较，舒芬太尼组大鼠心肌组织中LncRNA-MALAT1表达水平、心肌细胞凋亡率、cleaved-caspase-3蛋白表达水平和Bax/Bcl-2比值均明显降低（P<0.05），p-ERK1/2蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。细胞实验，与对照组比较，模型组H9C2细胞中cleaved-caspase-3蛋白表达水平和Bax/Bcl-2比值明显升高（P<0.05），p-ERK1/2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）；与模型组比较，舒芬太尼组H9C2细胞中cleaved-caspase-3蛋白表达水平和Bax/Bcl-2比值明显降低（P<0.05），p-ERK1/2蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；与MALAT1组比较，舒芬太尼+MALAT1组H9C2细胞中cleaved-caspase-3蛋白表达水平和Bax/Bcl-2比值明显降低（P<0.05），p-ERK1/2蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。

舒芬太尼能减轻MIRI大鼠心肌细胞凋亡，其作用机制可能与抑制LncRNA-MALAT1表达从而激活ERK1/2信号通路有关。

基于CRISPR/Cas9技术构建低密度脂蛋白受体（LDLR）基因敲除的免疫缺陷小鼠模型，并对血液胆固醇水平进行分析评价，为构建具有高脂血症的免疫系统人源化小鼠模型提供新方法。

基于CRISPR/Cas9技术，将有效识别LDLR基因外显子2和18的sgRNA/Cas9 mRNA注射到NOD SCID小鼠的受精卵中，通过对新生小鼠基因型鉴定筛选得到基因敲除的F0代阳性（LDLR^+/－，Aa）小鼠，再将此小鼠与NOD SCID（LDLR^+/+，AA）小鼠繁育，鉴定得到能稳定遗传基因型的F1代（Aa）小鼠。将F1代阳性杂合小鼠与NOD SCID小鼠繁育，获得大量基因序列完全相同的F2代（Aa）小鼠，在F2代间进行大规模繁育，获得的F3代小鼠依据基因型和性别进行分组，分别为雄性AA、雄性Aa、雌性AA和雌性Aa，对体质量进行监测，同时采集外周血进行血液胆固醇水平检测。

通过上述构建方法获得了NOD SCID LDLR^+/－（Aa）小鼠，经过8周的体质量检测，Aa杂合子基因型在生长发育过程中并不影响小鼠体质量，雌性Aa的胆固醇水平为（100.80±4.42）mg·dL^－1，雄性Aa的胆固醇水平为（120.56±11.16）mg·dL^－1，与阴性对照（基因型为AA的小鼠）比较，胆固醇水平明显升高（P<0.05）；雌性AA的胆固醇水平为（60.78±2.11）mg·dL^－1，雄性AA的胆固醇水平为（75.43±10.06）mg·dL^－1，两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。

在不影响小鼠体质量的前提下，通过CRISPR/Cas9技术在NOD SCID 背景下成功构建出了胆固醇水平自发升高的小鼠模型。